一种调控C/EBPα基因表达的方法及C/EBPα表达抑制剂

112552155 a所述的方法进行制备。当然，技术人员也可依据一般的合成原理，对该化合物进行人工合成。
15.本发明所述5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮的制备方法为：
16.高良姜水提物浸膏制备：高良姜药材晾干粉碎，取500g加入体积浓度95％的乙醇提取3次，每次1h，乙醇提取过的高良姜残渣晾干后加2l水提取3次，每次1h，合并水提物浓缩至250ml，加入937.5ml的体积浓度95％的乙醇，使溶液配成体积浓度85％乙醇萃取水提物，4℃冰箱中静置30h得上清液，浓缩为高良姜水提物浸膏。
17.取高良姜水提物浸膏，采用硅胶柱层析干法上样，装柱后，洗脱剂分别按照体积比例为氯仿：甲醇100：1、100：2、100：3、100：6、100：10、100：15、100：20、100：25、100：30的9个梯度进行冲洗。在100：10得到第一冲洗物旋蒸，取旋蒸后的第一冲洗物0.4g上凝胶柱，以甲醇洗脱，得到1-82-3流份为混合物，石油醚：乙酸乙酯5：1.5展开点板如下图1。将1-82-3流份旋蒸，甲醇溶解微孔滤膜滤过后上制备液相仪，在流动相的a相为甲醇，b相为水；当a：b＝70：30，在23-25.5min接峰，展开剂石油醚：乙酸乙酯5：1.5展开点板确定为单体(见图2)，通过核磁共振鉴定为5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮。
18.以上5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮的制备方法仅为本发明提供的一个实例，技术人员可对上述方法进行适当调整以更加高效快速的得到该化合物，也可依据一般的合成原理，通过人工合成得到该化合物。
19.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
20.本发明公开一种调控c/ebpα基因表达的方法，通过1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮或其衍生物能够有效下调c/ebpα基因表达。
21.该方法操作简便，给药浓度较低，效果明显，易于推广应用。该方法的提出为c/ebpα基因功能的研究及相关疾病的治疗建立基础。
附图说明
22.图1：1-82-3流份点板图
23.图2：液相制备后点板图
24.图3：5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮对c/ebpα基因表达的影响，(注：#p为空白组与模型组比较，#p《0.05,##p《0.01,###p《0.001；*p为模型组与给药组比较，*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001)
25.图4：1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮对c/ebpα基因表达的影响，(注：#p为空白组与模型组比较，#p《0.05,##p《0.01,###p《0.001；*p为模型组与给药组比较，*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001)
具体实施方式
26.为对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，发明人结合实施例和附图进行说明，但以下实施例所描述的仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
27.实施例
28.1材料、试剂和仪器
29.1.1实验材料
total rna extraction kit(分类号ls1040，中国上海普洛美生物制品有限公司)从成熟的3t3-l1前细胞中提取总rna，并使用纳米光度计-n50超显微分光光度计(implen，德国)确认提取rna的质量。使用hifair iii 1
st strand cdna synthesis supermix for qpcr(产品编号11141es60，翌圣生物科技(上海)股份有限公司)rna逆转录试剂盒将rna样本逆转录成cdna，pcr扩增所用试剂盒为hieff qpcr sybr green master mix(产品编号11202es08，翌圣生物科技(上海)股份有限公司)，c/ebpα引物由海口宇氏生物科技有限公司设计合成，其引物序列见表1。pcr扩增在以下条件下进行：在95℃下初始激活热启动dna聚合酶5分钟，然后进行第二步的40个循环(即，95℃10秒，58℃20秒，72℃20秒)。然后是熔融曲线阶段，最后得到扩增引物。用-δδct法分析c/ebpα基因的相对表达，gapdh用作内部参考。qpcr引物序列如表1所示。
43.表1qpcr c/ebpα引物序列
[0044][0045]
2.5统计学分析
[0046]
用统计学分析软件graphpadprism5.0整理分析数据，实验数据采用均值
±
标准差(x
±
s)表示。组间差异比较用t检验，方差不齐用非参数检验，多组间比较用单因素方差分析，p《0.05，即认为差异具有统计学意义。
[0047]
2.6结果与分析
[0048]
细胞活力实验结果：
[0049]
5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮在给药浓度为80-100μm时，显著性地抑制该细胞活性，其细胞存活率分别为95.01％(80μm)和88.63％(100μm)。而1-40μm的给药浓度对该细胞无显著性影响。因此，采用30μm浓度作为5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮后续实验的给药浓度。
[0050]
1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮在给药浓度为60μm时，显著性地抑制该细胞活性，其细胞存活率分别为87.32％。而1-40μm的给药浓度对该细胞无显著性影响。因此，采用30μm作为1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮后续实验的给药浓度。
[0051]
c/ebpα基因mrna水平检测结果：
[0052]
与空白组相比，模型组的c/ebpα基因表达明显增高，罗格利酮作为pparγ激动剂可以通过激动pparγ上调c/ebpα基因表达，这和我们的结果一致。而5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮、1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮预处理16小时后，给药组的c/ebpα基因表达明显下降，表明5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮可以抑制c/ebpα基因表达。(图3、图4)
[0053]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


技术特征：
1.一种调控c/ebpα基因表达的方法，其特征在于，包括：采用1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮和/或其衍生物处理细胞以调控细胞c/ebpα基因表达。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生物为5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述调控为下调。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞为3t3-l1细胞。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理细胞为：细胞给药孵育16小时。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，给药浓度为1～40μm。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，给药浓度为30μm。8.一种c/ebpα表达抑制剂，其特征在于，含有1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮和/或其衍生物。9.根据权利要求8所述的c/ebpα表达抑制剂，其特征在于，其衍生物为5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮。

技术总结
本发明公开一种调控C/EBPα基因表达的方法及C/EBPα表达抑制剂，通过1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮和/或其衍生物处理细胞以调控细胞C/EBPα基因表达。所述衍生物为5-羟基-1,7-二苯基-4-庚烯-3-酮。该方法操作简便，给药浓度较低，效果明显，易于推广应用。该方法的提出为C/EBPα基因功能的研究及相关疾病的治疗建立基础。础。


技术研发人员：李海龙 李湘怡 刘爱霞 文欢 郑秀炆 周明艳 张钰昕 张俊清 张旭光 白飞虎
受保护的技术使用者：海南医学院
技术研发日：2022.03.09
技术公布日：2022/7/1