技术领域本发明涉及螺的多倍体繁育方法，具体涉及螺三倍体纯系高效育成方法。
背景技术：
螺的分布、种类多，是指腹足类(gastropod)动物，特别是指有一个封闭的壳，可以完全缩入其中以得保护的腹足类动物，常见的有环棱螺、田螺等等，螺的繁育方式一般为卵胎生。因螺三倍体的不育特征，使其在生长速度、抗病性、肉质等方面表现出更为显著的优势。现有技术中，要获得三倍体不育螺，最快捷有效的方法是通过四倍体螺与二倍体螺倍间杂交获得，那么就需要建立遗传稳定、纯度极高的四倍体螺纯系。但在螺的遗传育种中，到目前为止还未见四倍体全雄螺育成的报道，更未见用全雄四倍体与二倍体母本回交的先例。
技术实现要素：
针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种方法稳定、种群纯度高达100%的螺三倍体纯系高效育成方法。为达到上述目的，本发明的技术方案如下：螺三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为90-95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到螺人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10～15g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母螺产卵前5～10天，按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母螺投喂5～10g，下午6：00每100g母螺投喂10～15g；至其卵发育成熟，然后，取公螺放在一起，使其自然产卵受精，得受精怀卵母螺；（3）静空压处理：在一次卵裂时，采用静空压的方法，把步骤（2）中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中，静空压压力为250～340Kg/cm2，持续时间为3～5min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为100～200mg/l，睾酮的浓度为10～50mg/l；（5）取步骤（3）处理后的怀卵母螺，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴60～120S，怀卵母螺与溶液比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达5～10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的怀卵母螺，放入育苗池中进行常规育苗培育；直至产出幼螺，从而获得螺的雄性四倍体纯系；（7）取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。本发明的优点：1、本发明中对母本进行添加他莫昔芬饲料投喂，起到抑制DNA分裂和促雄性的双重作用的同时，将受精卵第一次卵裂的时间推迟了3～5min，并提高所有受精卵第一次卵裂的同步程度（可达99%），为操作下一步提供时间保障和奠定染色体加倍基础；2、在受精卵第一次卵裂采用较低的静空压压力（低于常用350kg/cm2）和较短的处理时间（低于5min），不仅有效减少对受精卵的不良影响，提高受精卵的成活率；而且进一步加强了四倍体的形成机率；3、雌激素抑制剂溶液浸泡，再一次强化与保证其雄性的转化率；4、用纯系的雄性四倍体与原有的雌性二倍体回交，有效保证了三倍体的纯度。因而通过此方法，可获得100%的三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。具体实施方式现结合具体实施例，对本发明作进一步描述。实施例一螺雄性四倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到螺人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为10g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母螺产卵前5天，按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母螺投喂10g，下午6：00每100g母螺投喂15g；至其卵发育成熟，然后，取公螺放在一起，使其自然产卵受精，得受精怀卵母螺；（3）静空压处理：在一次卵裂时，采用静空压的方法，把步骤（2）中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中，静空压压力为340Kg/cm2，持续时间为3min；（4）雌激素抑制剂配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为200mg/l，睾酮的浓度为50mg/l；（5）取步骤（3）处理后的怀卵母螺，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴120S，怀卵母螺与溶液比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达5mg/l；（6）取步骤（5）处理后的怀卵母螺，放入育苗池中进行常规育苗培育；直至产出幼螺，从而获得螺的雄性四倍体纯系。（7）取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。实施例二螺雄性四倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到螺人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为15g/500g喂养料，待用；（2）投喂：在母螺产卵前10天，按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母螺投喂5～10g，下午6：00每100g母螺投喂10g；至其卵发育成熟，然后，取公螺放在一起，使其自然产卵受精，得受精怀卵母螺；（3）静空压处理：在一次卵裂时，采用静空压的方法，把步骤（2）中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中，静空压压力为250Kg/cm2，持续时间为5min；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180mg/l，睾酮的浓度为30mg/l；（5）取步骤（3）处理后的怀卵母螺，放入用步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温泡浴60S，怀卵母螺与溶液比为1：2，通过充氧，使溶液中的氧气含量达10mg/l；（6）取步骤（5）处理后的怀卵母螺，放入育苗池中进行常规育苗培育；直至产出幼螺，从而获得螺的雄性四倍体纯系。（7）取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。上述两个实施例仅为本发明的优选方案之二，并不能限制本发明的保护范围，任意与本发明等同或相似的技术手段视为本发明的保护范围。以下附上本发明部分处理方式及结果统计。附：螺三倍体育成结果统计注：上述结果是母螺产卵前10天投喂他莫昔芬，冷休克静空压保持5min、雌激素抑制剂溶液浸泡60s所取得的结果。