一种悬浮型生物种衣剂、它的制备方法与用图_2

文档序号:9292853阅读:来源:国知局
白胨、5g/L氯化钠 、pH 7.0-7. 2,20g/ L琼脂粉)平板中在温度30°C下活化培养48小时,然后挑取平板上一环菌苔,转接种到 NB液体培养基(5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7.0-7. 2)中,在温度30°C 与转速180印111条件下培养16 - 2011(对数生长期),再按照接种量5%转接种到发酵培 养基(3_5g/L 豆粉、5-10g/L 蔗糖、3-7g/L 淀粉、5-10g/L 葡萄糖、2-5g/L 蛋白胨、2-5g/ 1^〇&(:03,0.3-0.58/11(2即0 4,、0.3-0.58/1腿2?04、口!17.0~7.2)中,在温度30°(:与转速 180rpm的条件下培养约48小时直至产孢率多80%,枯草芽孢杆菌菌含量多150亿/ml时 停止进行培养。
[0036] 然后,将得到的发酵液使用碟片式离心机以转速7000rpm进行离心分离,得到一 种浓缩液,它再经喷雾干燥(进风口温度190°C、出风口温度90°C )得到所述的枯草芽孢杆 菌菌粉,采用常规检测方法检测,枯草芽孢杆菌含量多5000亿/g。
[0037] 本发明使用的多粘类芽孢杆菌例如是ACCC02239、ACCC01892、1. 541芽孢型菌株; 它们都是目前市场上获得的多粘类芽孢杆菌,例如由中国农业微生物菌种保藏管理中心、 中国普通微生物菌种保藏中心获得。
[0038] 含有多粘类芽孢杆菌的微生物浓缩物制备步骤如下:首先将保存于甘油管中的多 粘类芽孢杆菌在NB固体培养基(5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7.0-7. 2, 20g/L琼脂粉)平板中在温度28°C下活化培养24-48小时,从该平板上挑取一环菌苔, 然后接种到NB液体培养基(5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7.0-7. 2)中, 在温度28°(:与转速180印111的条件下培养18-2411(对数生长期),再按照接种量8%转接 种到发酵培养基(10-30g/L豆粉、5-10g/L蔗糖、5-10g/L淀粉、5-10g/L蛋白胨、l-5g/ L CaC03,0.3-0.5g/L K2HP04、0.3-0.7g/L KH2P04、0.01-0.02g/L MnS04、2-4g/L 氯化钠、 0. 1-0. 4g/L硫酸镁、pH 7. 0~7. 2)中,在温度28°C与转速180rpm的条件下培养48-56小 时直至产孢率多80%,多粘类芽孢杆菌菌体含量多150亿/ml时停止培养。
[0039] 接着,将得到的发酵液使用碟片式离心机在转速7000rpm的条件下进行离心分 离,得到一种浓缩液,它再经喷雾干燥(进风口温度190°C、出风口温度90°C )得到所述的 多粘芽孢杆菌菌粉,采用常规检测方法检测,多粘类芽孢杆菌含量多5000亿/g。
[0040] 本发明使用的解淀粉芽孢杆菌例如是ACCC01855、ACCC04274或G頂1. 430芽孢型 菌株;它们都是目前市场上获得的解淀粉芽孢杆菌,例如由中国农业微生物菌种保藏管理 中心、广东省微生物菌种保藏中心或中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。
[0041] 含有解淀粉芽孢杆菌的微生物浓缩物制备步骤如下:首先将保存于甘油管中的解 淀粉芽孢杆菌置于NB固体培养基(5g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7. 0-7. 2, 20g/L琼脂粉)平板中,在温度28°C的条件下活化培养24-48小时,从该平板上挑取一环菌 苔,然后转接种到NB液体培养基(牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L、pH 7. 0-7. 2) 中,在温度28°(:与转速180印111条件下培养20-2411(对数生长期),再按照接种量6%转接 种到发酵培养基(5_8g/L玉米浆、5-10g/L蔗糖、10-15g/L淀粉、3-7g/L蛋白胨、2-5g/L CaC0 3、0. 3-0. 6g/L Κ2ΗΡ04、0· 3-0. 7g/L KH2P04、2-4g/L 氯化钠、0· 2-0. 4g/L 硫酸镁、2-5g/L 牛肉膏、pH 7. 0~7. 2)中,在温度35°C与转速200rpm的条件下培养约35-46小时直至产 孢率多80%,解淀粉芽孢杆菌含量多150亿/ml时停止培养。
[0042] 然后将得到的发酵液使用碟片式离心机在转速7000rpm的条件下离心分离得到 一种浓缩液,再采用喷雾干燥(进风口温度190°C、出风口温度90°C )得到所述的解淀粉芽 孢杆菌菌粉,采用常规检测方法检测,解淀粉芽孢杆菌含量多5000亿/g。
[0043] 本发明使用的地衣芽孢杆菌例如是ACCC02002、ACCC01468、或G頂1. 542芽孢型菌 株;它们都是目前市场上获得的地衣芽孢杆菌,例如由中国农业微生物菌种保藏管理中心、 广东省微生物菌种保藏中心或中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。
[0044] 含有地衣芽孢杆菌的微生物浓缩物制备步骤如下:首先将保存于甘油管中的地衣 芽孢杆菌在NB固体培养基(3g/L牛肉膏、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7. 0-7. 2,20g/L 琼脂粉)平板中在温度28°C的条件下活化培养24-48小时,从该平板上挑取一环菌苔,然 后转接种到NB液体培养基(5g/L牛肉膏、lOg/L蛋白胨、5g/L氯化钠 、pH 7. 0-7. 2)中,在 温度32°C与转速180rpm的条件下培养20-24h(对数生长期),再按照接种量5%转接种到 发酵培养基(5-10g/L玉米浆、5-10g/L葡萄糖、2-8g/L淀粉、2-7g/L蛋白胨、2-5g/L CaCl2、 0· 3-0. 8g/L Κ2ΗΡ04、0· 3-0. 8g/L NaH2P04、2-5g/L 氯化钠、0· 2-0. 8g/L 硫酸镁、2-4g/L 硫酸 铵、2-5g/L酵母膏、pH 7. 0~7. 2)中,在温度32°C与转速200rpm的条件下培养约48小时 直至产孢率彡80%,地衣芽孢杆菌含量彡150亿/ml时停止培养。
[0045] 然后将得到的发酵液使用碟片式离心机在转速7000rpm条件下离心分离得到一 种浓缩液,再采用喷雾干燥(进风口温度190°C、出风口温度90°C )得到所述的地衣芽孢杆 菌菌粉,采用常规检测方法检测,地衣芽孢杆菌含量多5000亿/g。
[0046] 本发明使用的哈茨木霉菌例如是ACCC30371、ACCC32428或GHO. 442真菌型菌株; 它们都是目前市场上获得的哈茨木霉菌株,例如由中国农业微生物菌种保藏管理中心、广 东省微生物菌种保藏中心或中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏单位获得。
[0047] 含有哈茨木霉菌的微生物浓缩物制备步骤如下:将哈茨木霉菌株接种于PDA固体 培养基(200g马铃薯;20g/L葡萄糖;15~20g/L琼脂)平板上在温度26°C下培养72h, 用灭菌蒸馏水洗涤,再制成哈茨木霉菌孢子液(I X IO6个/mL),按照接种量9%接种到固 体发酵培养基(5-20%麸皮、0. 5-1. 5%蔗糖、0. 5-1. 5%蛋白栋、0. 01-0. 05%磷酸二氢钾、 40-50%水),在温度26°C的条件下发酵7-9d,得到一种固体培养物,它采用低温(20-40°C ) 干燥粉碎,使用旋风分离器收集孢子粉,采用常规检测方法检测,该孢子粉的哈茨木霉菌含 量彡100亿/g。
[0048] 本发明使用的白僵菌例如是ACCC30112、ACCC30749或GHO. 428真菌型菌株;它们 都是目前市场上获得的白僵菌,例如由中国农业微生物菌种保藏管理中心、广东省微生物 菌种保藏中心或中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。
[0049] 含有白僵菌的微生物浓缩物制备步骤如下:将白僵菌菌株接种于PDA固体培养基 (200g/L马铃薯、20g/L葡萄糖、15~20g/L琼脂)平板上在温度26°C的条件下培养72h, 用灭菌蒸馏水洗涤,再制成孢子液(I X IO6个/mL),按照接种量5%接种到固体发酵培养基 (5-10%麸皮、10-15%玉米粉、0. 5-2%葡萄糖、0. 2-2%硝酸铵、0. 01-0. 05%磷酸二氢钾、 0. 01-0. 05%磷酸氢二钾、40-50%水,pH6. 2)中,在温度28°C下发酵7-9d,得到一种固体培 养物,培养物经低温(20_40°C )干燥粉碎,收集旋风分离器中的孢子粉,经检测孢子粉的白 僵菌含量多100亿/g。
[0050] 本发明使用的淡紫拟青霉菌例如是AC
当前第2页1 2 3 4 5 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1