一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物的制作方法

本发明涉及一种组合物，尤其涉及一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物。

背景技术：

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的神经退行性疾病之一，多发于老年。其主要病征是患者大脑中出现以β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Abeta)为主要成分的老年斑和异常磷酸化的tau蛋白形成的神经纤维缠绕(neuroFibrillary tangles,NFTs)以及神经元缺失。阿尔茨海默症患者的认知、动作等一系列高级神经功能会逐渐发生障碍，最终丧失生活自理能力。随着全球人口的老龄化，阿尔茨海默症的患病几率在世界各地都持续增长。近年来，我国60岁以上的人群中约有1.6％被诊断为阿尔茨海默症，并且该比例正在逐年升高。对阿尔茨海默症患者的护理和治疗，已给家庭和社会带来越来越沉重的精神压力和经济负担，成为人们面临的一个严峻的医疗和社会问题；然而，目前国内外缺少预防或治疗阿尔茨海默症的有效药物。

技术实现要素：

为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物。

为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

优选的，一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

优选的，一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由40份的虾青素、20份的牛磺酸、5份的姜黄素、5份的银杏黄酮、10份的茶多酚、5份的枸杞多糖、5份的维生素B12、5份的维生素E组成。

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，制成片剂或胶囊或口服液使用。

本发明的配方依据如下：

虾青素(3,3’-二羟基-beta,beta-胡萝卜素-4,4’-二酮)属于类胡萝卜素，是存在于鱼、虾和藻类中的一种强抗氧化剂，其抗氧化活性大约为β-胡萝卜素的10倍、维生素E的100倍。在细胞和动物模型中，虾青素能有效清除细胞内的氧自由基，降低脂质过氧化和氧化应激。人体补充虾青素具有一系列的健康促进作用，包括免疫调节、预防和治疗心血管疾病和癌症等。近年来国内外对虾青素功能的研究使我们对它的生物活性有了更多的认识。体外实验显示，在神经细胞模型中，虾青素可以降低6-羟基多巴胺诱导的氧化应激、线粒体损伤和细胞凋亡；在大脑缺血动物模型中，虾青素可通过抑制氧化应激、减少谷氨酸释放和细胞凋亡降低大脑的自由基损伤和脑梗塞。

牛磺酸又称β-氨基乙磺酸，是生物体内的一种含硫氨基酸，具有多种生理功能。作为人体必需的营养成分之一，牛磺酸对于婴幼儿的智力和视觉功能的发育具有促进作用。同时，牛磺酸有益于维持细胞内的钾钠钙平衡。此外，牛磺酸也具有抗氧化功能，能够降低细胞内的氧化应激。

姜黄素是姜黄中的一种重要的活性物质，有很强的抗氧化性以及抗炎、防癌作用。在AD转基因小鼠模型中，姜黄素可以抑制β-淀粉样蛋白的生成并促进其分解。

银杏黄酮是银杏叶提取物中的活性成分，对预防心血管疾病有较好作用。此外，细胞实验和动物实验研究成果显示，银杏黄酮能够抑制β-淀粉样蛋白对神经细胞造成的毒性损伤以及β-淀粉样蛋白诱导的其它病理行为。

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，主要化学成分为儿茶素类(黄烷醇类)、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚合酚类等化合物的复合体。茶多酚不仅具有较强的抗氧化作用，而且具有广泛的生物活性，如预防和治疗辐射损伤、抵抗病毒和细菌、降脂和预防动脉粥样硬化以及癌症预防和辅助治疗等。动物实验发现，茶多酚可以抑制β-淀粉样蛋白的生成并增强动物的记忆能力。

枸杞多糖是从枸杞中提取的活性物质。研究发现枸杞多糖具有多种生物活性，包括免疫调节功能、抗衰老、抗肿瘤、降低血脂和预防心血管疾病等。同时，动物实验研究显示枸杞多糖对β-淀粉样蛋白诱导的神经毒性具有抑制作用。

维生素B12是人体必需的维生素。它除了对DNA的合成具有重要作用之外，还是维护神经髓鞘的代谢与功能所必须的，维生素B12的缺乏可造成神经、大脑系统的退化损伤。

维生素E是应用较为广泛的脂溶性抗氧化剂，对羟基、超氧阴离子、含氮自由基都有明显的清除作用，可以有效防止活性氧引起的细胞损伤，具有保护细胞、延缓衰老的作用。

本发明配方搭配合理巧妙，各组分间相互协同，可对阿尔茨海默症起到很好的预防和治疗作用，且该产品安全、有效率高、无任何毒副作用。

附图说明

图1为实施例一AD转基因线虫模型中的非瘫痪率曲线图。

图2为实施例一AD转基因线虫模型中的Abeta沉积柱状图。

图3为实施例一AD转基因线虫模型中的ROS水平柱状图。

图4为实施例一AD转基因线虫模型中的GSH水平柱状图。

图5为实施例一AD转基因小鼠对可见平台的训练结果柱状图。

图6为实施例一AD转基因小鼠对隐藏平台的训练结果柱状图。

图7为实施例一AD转基因小鼠的大脑切片Abeta沉积柱状图。

图8为实施例一AD转基因小鼠的大脑切片凋亡细胞柱状图。

图9为实施例一对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞成活率的影响。

图10为实施例一对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。

图11为实施例一对过氧化氢诱导的促凋亡Bcl-2家族蛋白Bak基因的表达影响。

图12为实施例一对过氧化氢诱导的抗凋亡Bcl-2家族蛋白基因的表达影响。

图13为实施例一对过氧化氢诱导的抗凋亡Bcl-XL家族蛋白基因的表达影响。

图14为实施例一对过氧化氢诱导的caspase-3的活性影响。

图15为实施例一对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞的ROS水平柱状图。

图16为实施例一对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞的GSH水平柱状图。

图17为实施例二AD转基因线虫模型中的非瘫痪率曲线图。

图18为实施例二AD转基因线虫模型中的Abeta沉积柱状图。

图19为实施例二AD转基因小鼠对隐藏平台的训练结果柱状图。

图20为实施例三AD转基因线虫模型中的非瘫痪率曲线图。

图21为实施例三AD转基因线虫模型中的Abeta沉积柱状图。

图22为实施例三AD转基因小鼠对隐藏平台的训练结果柱状图。

图23为实施例四AD转基因线虫模型中的非瘫痪率曲线图。

图24为实施例四AD转基因线虫模型中的Abeta沉积柱状图。

图25为实施例四AD转基因小鼠对隐藏平台的训练结果柱状图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

本发明由以下质量份数的原料组成：

优选的，一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

优选的，一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由40份的虾青素、20份的牛磺酸、5份的姜黄素、5份的银杏黄酮、10份的茶多酚、5份的枸杞多糖、5份的维生素B12、5份的维生素E组成。

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，制作成片剂或胶囊或口服液使用。

下面通过具体实施例对本发明的配方和作用效果作进一步的说明：

实施例一、

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

辅料为3份的淀粉。将原料及辅料添加到一起后制作成片剂，每片2g。

(1)实施例一的AD转基因线虫模型实验

在AD转基因线虫模型中，人类Abeta42肽在线虫体壁肌肉细胞内表达并形成粥样蛋白(Abeta)沉积，线虫表现为肌肉麻痹和渐行性瘫痪。实验发现，在含有不同浓度组合物的培养基上培养的线虫与在溶剂对照培养基上培养的线虫相比，发生瘫痪的比例均有所降低，表现为线虫非瘫痪率(worms not paralyzed)升高，如图1所示。其中，250ng/ml的配方对线虫瘫痪的抑制作用最强，能够显著提高线虫的非瘫痪率。在诱导Abeta表达80h时，在250ng/ml配方和对照培养基上培养的线虫的非瘫痪率分别为47％和23％。

此外，该组合物配方可显著降低AD线虫体内的粥样蛋白沉积，如图2所示。其中，C表示对照线虫，AD表示Abeta过量表达线虫，F1表示实施例一组合物，AD+F1表示组合物处理过的AD线虫。从图2可以看出，AD线虫中的Abeta沉积个数为6个，而AD+F1线虫中的Abeta沉积个数降低为3个，二者具有显著性差异(p＜0.05)。

同时，该组合物配方可以降低AD线虫体内的氧化应激，如图3、图4所示。从图中可以看出，Abeta诱导20h后AD线虫体内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平显著升高，同时谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平显著降低。采用250ng/ml的组合物处理后，AD+F1线虫体内的ROS水平明显降低(p＜0.05)，GSH水平恢复，因此该组合物可以增加AD线虫体内的抗氧化能力并抑制氧化应激。

(2)实施例一的APP/PSN双转基因小鼠的认知能力实验

APP/PSN双转基因小鼠随着年龄增加，大脑内出现淀粉样蛋白沉积，并且认知功能显著低于同龄野生型小鼠。实验选取5月龄的APP/PSN双转基因小鼠，给予含有组合物的食物，3个月后利用Morris water maze(摩里斯水迷宫)对其空间认知能力进行测试。实验结果显示，第一天进行可见平台训练时，对于找到可见平台的latency time(等待时间),野生型小鼠和APP/PSN小鼠没有区别；组合物喂食与否不影响APP/PSN小鼠找到可见平台的latency time，如图5所示。其中，WT表示野生型小鼠，APP/PSN表示AD小鼠模型，APP/PSN+F1表示喂食组合物的AD小鼠。

对这些小鼠进行隐藏平台训练，5天后测试其空间学习和记忆能力，结果显示，与WT小鼠相比，APP/PSN小鼠找到平台的latency time显著增加，说明其空间学习和记忆能力显著下降；而APP/PSN+F1小鼠找到平台的latency time比不喂食组合物的APP/PSN小鼠显著下降(p＜0.05)，如图6所示，说明其空间学习和记忆能力显著改善。此结果显示该组合物对淀粉样蛋白诱导的认知能力下降具有抑制作用。

ThioFlavin S(硫磺素S)染色结果显示，喂食组合物明显减少了APP/PSN小鼠大脑内的淀粉样蛋白沉积(p＜0.05)，如图7所示。

利用TUNEL法(terminal dexynucleotidyl transFerase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法)对小鼠大脑皮质凋亡细胞进行测定，发现喂食组合物显著降低APP/PSN小鼠大脑皮质凋亡细胞的数量(p＜0.05)，如图8所示。

(3)实施例一的抗病机制研究

氧化应激是AD病理发展的重要因素，也是介导Abeta毒性的重要机制。SH-SY5Y细胞用组合物预处理后再用过氧化氢处理，以台盼蓝染色排除法检测细胞的存活率(Cell viability)。检测结果如图9所示，以组合物成分预处理细胞可以降低过氧化氢诱导的细胞毒性,SH-SY5Y细胞的成活率提高了32％。其中，Control表示对照组，H₂O₂表示用过氧化氢处理组；F1+H₂O₂表示实施例一预处理之后再用过氧化氢处理的细胞成活率。

此外，组合物成分预处理可以显著降低过氧化氢诱导的细胞凋亡(p＜0.05)，如图10所示。其中，Control表示对照细胞，H₂O₂表示用过氧化氢处理之后的细胞，F1+H₂O₂表示实施例一预处理之后再用过氧化氢处理的细胞。

同时，组合物成分预处理显著降低过氧化氢诱导的调亡信号如促凋亡Bcl-2家族蛋白Bak基因的表达增加(图11)、抗凋亡Bcl-2家族蛋白基因的表达下降(图12、图13)以及caspase-3活性升高(图14)等。以上结果表明，组合物成分可能通过抑制氧化应激诱导的凋亡信号而对细胞起到保护作用。

细胞内氧化还原状态对细胞的存活起到重要作用。如图15所示，配方成分预处理可以显著降低过氧化氢诱导的活性氧(ROS)生成。谷胱甘肽(GSH)是细胞内氧化还原平衡的一个标志，过氧化氢处理细胞2h时，GSH的水平显著降低，标志了细胞还原能力的下降；而组合物成分预处理对过氧化氢诱导的GSH水平下降具有显著的抑制作用，如图16所示。因此，配方成分在一定程度上对细胞内的还原能力起到了恢复作用，这与其能够抑制氧化应激诱导的细胞毒性紧密相关。

实施例二：

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

辅料为80份的淀粉。将原料及辅料添加到一起后制作成胶囊，每粒1g。

(1)实施例二的AD转基因线虫模型实验

实验发现，在含有不同浓度组合物的培养基上培养的线虫与在溶剂对照培养基上培养的线虫相比，发生瘫痪的比例均有所降低，表现为线虫非瘫痪率升高，如图17所示。其中，250ng/ml的配方对线虫瘫痪的抑制作用最强，能够显著提高线虫的非瘫痪率。在诱导Abeta表达80h时，在250ng/ml配方和对照培养基上培养的线虫的非瘫痪率分别为43％和22％。

此外，该组合物配方可显著降低AD线虫体内的粥样蛋白沉积，如图18所示。其中，C表示对照线虫，AD表示Abeta过量表达线虫，F2表示实施例二组合物，AD+F2表示组合物处理过的AD线虫。从图18可以看出，AD+F2线虫中的Abeta沉积个数明显降低，二者具有显著性差异(p＜0.05)。

(2)实施例二的APP/PSN双转基因小鼠的认知能力实验

选取5月龄的APP/PSN双转基因小鼠进行实验，给予含有组合物的食物，3个月后利用Morris water maze对其空间认知能力进行测试。对这些小鼠进行隐藏平台训练，5天后测试其空间学习和记忆能力，结果显示，与WT小鼠相比，APP/PSN小鼠找到平台的latency time显著增加，说明其空间学习和记忆能力显著下降；而APP/PSN+F2小鼠找到平台的latency time比不喂食组合物的APP/PSN小鼠显著下降(p＜0.05)，如图19所示，说明其空间学习和记忆能力显著改善。其中，WT表示野生型小鼠，APP/PSN表示AD小鼠模型，APP/PSN+F2表示喂食组合物的AD小鼠。此结果显示该组合物对淀粉样蛋白诱导的认知能力下降具有抑制作用。

实施例三：

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

辅料为：200份的蜂蜜、200份的柠檬酸、500L的水。将原料及辅料添加到一起后制备成口服液，每支10ml。

(1)实施例三的AD转基因线虫模型实验

实验发现，在含有不同浓度组合物的培养基上培养的线虫与在溶剂对照培养基上培养的线虫相比，发生瘫痪的比例均有所降低，表现为线虫非瘫痪率升高，如图20所示。其中，250ng/ml的配方对线虫瘫痪的抑制作用最强，能够显著提高线虫的非瘫痪率。在诱导Abeta表达80h时，在250ng/ml配方和对照培养基上培养的线虫的非瘫痪率分别为47％和27％。

此外，该组合物配方可显著降低AD线虫体内的粥样蛋白沉积，如图21所示。其中，C表示对照线虫，AD表示Abeta过量表达线虫，F3表示实施例二组合物，AD+F3表示组合物处理过的AD线虫。从图21可以看出，AD+F3线虫中的Abeta沉积个数明显降低，二者具有显著性差异(p＜0.05)。

(2)实施例三的APP/PSN双转基因小鼠的认知能力实验

选取5月龄的APP/PSN双转基因小鼠进行实验，给予含有组合物的食物，3个月后利用Morris water maze对其空间认知能力进行测试。对这些小鼠进行隐藏平台训练，5天后测试其空间学习和记忆能力，结果显示，与WT小鼠相比，APP/PSN小鼠找到平台的latency time显著增加，说明其空间学习和记忆能力显著下降；而APP/PSN+F3小鼠找到平台的latency time比不喂食组合物的APP/PSN小鼠显著下降(p＜0.05)，如图22所示，说明其空间学习和记忆能力显著改善。其中，WT表示野生型小鼠，APP/PSN表示AD小鼠模型，APP/PSN+F3表示喂食组合物的AD小鼠。此结果显示该组合物对淀粉样蛋白诱导的认知能力下降具有抑制作用。

实施例四：

一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的组合物，由以下份数的原料组成：

辅料为：80份的蜂蜜、80份的柠檬酸、200L的水。将原料及辅料添加到一起后制备成口服液，每支10ml。

(1)实施例四的AD转基因线虫模型实验

实验发现，在含有不同浓度组合物的培养基上培养的线虫与在溶剂对照培养基上培养的线虫相比，发生瘫痪的比例均有所降低，表现为线虫非瘫痪率升高，如图23所示。其中，250ng/ml的配方对线虫瘫痪的抑制作用最强，能够显著提高线虫的非瘫痪率。在诱导Abeta表达80h时，在250ng/ml配方和对照培养基上培养的线虫的非瘫痪率分别为51％和32％。

此外，该组合物配方可显著降低AD线虫体内的粥样蛋白沉积，如图24所示。其中，C表示对照线虫，AD表示Abeta过量表达线虫，F4表示实施例二组合物，AD+F4表示组合物处理过的AD线虫。从图24可以看出，AD+F4线虫中的Abeta沉积个数明显降低，二者具有显著性差异(p＜0.05)。

(2)实施例四的APP/PSN双转基因小鼠的认知能力实验

选取5月龄的APP/PSN双转基因小鼠进行实验，给予含有组合物的食物，3个月后利用Morris water maze对其空间认知能力进行测试。对这些小鼠进行隐藏平台训练，5天后测试其空间学习和记忆能力，结果显示，与WT小鼠相比，APP/PSN小鼠找到平台的latency time显著增加，说明其空间学习和记忆能力显著下降；而APP/PSN+F4小鼠找到平台的latency time比不喂食组合物的APP/PSN小鼠显著下降(p＜0.05)，如图25所示，说明其空间学习和记忆能力显著改善。其中，WT表示野生型小鼠，APP/PSN表示AD小鼠模型，APP/PSN+F4表示喂食组合物的AD小鼠。此结果显示该组合物对淀粉样蛋白诱导的认知能力下降具有抑制作用。

综上所述，本发明在转基因线虫和转基因鼠老年痴呆症模型中，可以显著抑制转基因线虫和小鼠模型中Abeta诱导的病理行为。其作用机制为：通过抑制Abeta沉积，降低氧化应激诱导的凋亡信号，如抑制抗凋亡Bcl-2家族蛋白基因的表达下调和降低促凋亡Bcl-2家族蛋白Bak基因的表达增加以及caspase-3活性升高等促进神经细胞生存，起到有效预防和治疗阿尔茨海默症的效果。

上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。