本发明涉及治疗抗肝纤维化药物
技术领域：
，尤其涉及三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途。
背景技术：
：肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，表现为细胞外基质(ecm)大量合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ecm在肝脏内弥漫沉积。其起始于肝细胞(hc)坏死，随之是炎症反应、纤维生成介质释放，肝星状细胞(fsc)激活，最终以肝脏结缔组织成分的合成与降解明显失去平衡。肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理过程，是影响预后的重要因素。过去的20年间，肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中药与基因疗法等，但是理想的临床治疗手段仍然缺乏。目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活相关的环节，主要是：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因子紊乱，促进活化肝星状细胞凋亡；抑制肝脏成纤维细胞的增殖以及星状细胞激活大量分泌诱导肝脏成纤维细胞的增殖。技术实现要素：本发明针对现有技术的缺点，公开了三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途。为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途，药物是治疗抗肝纤维化药物，三叶青总黄酮的制备工艺：取10-30kg三叶青块茎粗粉，加入体积百分比为78-85％的乙醇回流提取3次，合并提取液减压回收乙醇，静置过夜后过滤，滤液用石油醚萃取3次脱脂后，过聚酰胺柱，依次用水、体积百分比为90-95％乙醇洗脱，将体积百分比为90-95％的乙醇洗脱液减压回收乙醇至干，即得三叶青总黄酮。对于治疗抗肝纤维化的三叶青总黄酮，使用体积百分比为78-85％的乙醇提取时，提取有效成分的效果更佳。作为优选，取20kg三叶青块茎粗粉。作为优选，加入体积百分比为80％的乙醇回流提取3次。对于治疗抗肝纤维化的三叶青总黄酮，使用体积百分比为80％的乙醇提取时，提取有效成分的效果更佳。作为优选，过聚酰胺柱，依次用水、95％乙醇洗脱，将体积百分比为95％的乙醇洗脱液减压回收乙醇至干。作为优选，包括建立肝纤维化小鼠模型，包括以下步骤，取18-22g雄性小鼠，在雄性小鼠腹腔每周3次注射2mg/kg的四氯化碳，持续六周，建立肝纤维化小鼠模型，分别在造模的1周、2周、4周、6周取材。与现有技术相比，本发明的有益效果为：肝纤维化已对国民经济发展和人们健康造成了重大影响，严重威胁人民的生命，已成为世界范围内危害健康的重要问题之一，进一步加快其前期病理进程“肝纤维化”的发病机制和创新药物研发，显得刻不容缓。国内外表性的抗hf药物有秋水仙碱、青霉胺、前列腺素e2、瓜蒂素、汉防己甲素、桃仁制剂、冬虫夏草制剂和复方丹参制剂等，但大都疗效不明显且副作用较大。三叶青总黄酮是三叶青主要成分，对肝纤维化具有良好的治疗效果。本发明选用三叶青总黄酮治疗肝纤维化，具有多成分、多靶点、多途径和不易复发等优势，将成为国内外研发创新药物的一条主要途径。本发明是一种高效和副作用较小的肝纤维化新型治疗药物。附图说明图1是病理切片图。其中，a、b、c、d、e、f用he染色，a是正常组，b是模型组，c是秋水仙碱组(阳性药)，d是总黄酮组(40mg/kg)，e是总黄酮组(80mg/kg)，f是总黄酮组(160mg/kg)；其中，a-1、b-1、c-1、d-1、e-1、f-1用masson染色，a-1是正常组，b-1是模型组，c-1是秋水仙碱组(阳性药)，d-1是总黄酮组(40mg/kg)，e-1是总黄酮组(80mg/kg)，f-1是总黄酮组(160mg/kg)。具体实施方式实施例1三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途，药物是治疗抗肝纤维化药物，三叶青总黄酮的制备工艺：取20kg三叶青块茎粗粉，加入体积百分比为80％的乙醇回流提取3次，合并提取液减压回收乙醇，静置过夜后过滤，滤液用石油醚萃取3次脱脂后，过聚酰胺柱，依次用水、体积百分比为95％乙醇洗脱，将体积百分比为95％的乙醇洗脱液减压回收乙醇至干，即得三叶青总黄酮。还包括建立肝纤维化小鼠模型，包括以下步骤，取18-22g雄性小鼠，在雄性小鼠腹腔每周3次注射2mg/kg的四氯化碳，持续六周，建立肝纤维化小鼠模型，分别在造模的1周、2周、4周、6周取材。1.三叶青总黄酮抗肝纤维化药效作用(如图1所示)：病理学检查结果表明，三叶青总黄酮成分不同剂量组能有效的保护肝细胞，防止肝细胞变性、坏死，即可阻止炎性细胞浸润、hsc活化及纤维组织增生，切断向肝纤维化、肝硬化发展的病理过程，并且长时间服用不会对肝功能造成不良影响，反而可能对肝有保护作用。2.三叶青总黄酮对肝纤维化小鼠血清alt、ast的影响表1三叶青总黄酮对肝纤维化小鼠血清alt、ast的影响组别alt(u/l)ast(u/l)正常组27.45±6.3264.78±9.64模型组146.21±12.09##124.98±9.94##秋水仙碱(0.2mg/kg阳性药)87.89±14.54**89.83±11.07**总黄酮低剂量(40mg/kg)135.76±10.79102.76±12.12总黄酮中剂量(80mg/kg)112.33±15.68**115.06±11.25**总黄酮高剂量(160mg/kg)86.39±9.24**89.56±16.19**注：##p<0.01vs.正常组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组.表1所示，肝纤维化模型大鼠血清alt、ast与正常组相比明显升高，三叶青总黄酮治疗组转氨酶均下降，阳性对照组秋水仙碱亦能明显降低模型小鼠血清转氨酶alt、ast。3.三叶青总黄酮对脂质过氧化物的影响(sod、gsh-px、mda)将肝组织研磨成糊状(9ml生理盐水/g肝组织)，4000r/min离心10min，取上清，即得10％组织匀浆液。按照elisa试剂盒说明检测sod、gsh-px、mda的含量。表2三叶青总黄酮对ccl4诱导的肝纤维化小鼠肝脏匀浆mda，sod和gsh-px水平的影响注：##p<0.01vs.正常组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组。表2所示，模型组小鼠肝匀浆中sod和gsh-px酶活性显著下降，而mda含量显著升高。给予三叶青总黄酮治疗后可显著降低升高的mda值，并显著升高sod和gsh-px活性。col组可显著降低的含量mda，可显著提高gsh-px酶活性。3.三叶青总黄酮对肝组织中hyp的影响：将肝组织研磨成糊状(9ml生理盐水/g肝组织)，4000r/min离心10min，取上清，即得10％组织匀浆液。按照elisa试剂盒说明检测hyp的含量。表3三叶青总黄酮对肝组织中hyp的影响注：##p<0.01vs.正常组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组。表3所示，肝脏hyp是反映肝纤维化程度的一个重要指标，结果显示，与正常对照组比较，模型大鼠肝组织匀浆hyp含量显著增高(p<0.01)，给予三叶青总黄酮(80,160mg/kg-)和秋水仙碱(0.2mg/kg)后，可显著降低肝匀浆hyp含量(p<0.01)。4.三叶青总黄酮对血清中tnf-α和il-6的影响：各组小鼠眼眶取血，静置后离心，取血清，操作步骤按照说明书，采用elisa法检测相关细胞因子tnf-α和il-6的含量。表4三叶青总黄酮对血清中tnf-α和il-6的影响组别tnf-α(fmol/ml)il-6(pg/ml)正常组18.59±3.56131.05±21.34模型组46.01±7.49##412.78±28.92##秋水仙碱(0.2mg/kg阳性药)32.39±3.34**289.53±31.46**总黄酮低剂量(40mg/kg)39.96±6.79*310.31±15.38*总黄酮中剂量(80mg/kg)33.03±5.67**268.25±27.51**总黄酮高剂量(160mg/kg)25.67±4.33**263.06±44.74**注：##p<0.01vs.正常组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组。表4结果表明，模型组大鼠tnf-α和il-6表达较正常对照组显著升高(p<0.01)。给予三叶青总黄酮(80,160mg/kg-)和秋水仙碱(0.2mg/kg)后，模型组大鼠血清tnf-α和il-6表达明显下降。实施例2三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途，药物是治疗抗肝纤维化药物，三叶青总黄酮的制备工艺：取10kg三叶青块茎粗粉，加入体积百分比为78％的乙醇回流提取3次，合并提取液减压回收乙醇，静置过夜后过滤，滤液用石油醚萃取3次脱脂后，过聚酰胺柱，依次用水、体积百分比为90-％乙醇洗脱，将体积百分比为90％的乙醇洗脱液减压回收乙醇至干，即得三叶青总黄酮。包括建立肝纤维化小鼠模型，包括以下步骤，取18-22g雄性小鼠，在雄性小鼠腹腔每周3次注射2mg/kg的四氯化碳，持续六周，建立肝纤维化小鼠模型，分别在造模的1周、2周、4周、6周取材。实施例3三叶青总黄酮在治疗抗肝纤维化药物中的用途，药物是治疗抗肝纤维化药物，三叶青总黄酮的制备工艺：取30kg三叶青块茎粗粉，加入体积百分比为85％的乙醇回流提取3次，合并提取液减压回收乙醇，静置过夜后过滤，滤液用石油醚萃取3次脱脂后，过聚酰胺柱，依次用水、体积百分比为92％乙醇洗脱，将体积百分比为92％的乙醇洗脱液减压回收乙醇至干，即得三叶青总黄酮。包括建立肝纤维化小鼠模型，包括以下步骤，取18-22g雄性小鼠，在雄性小鼠腹腔每周3次注射2mg/kg的四氯化碳，持续六周，建立肝纤维化小鼠模型，分别在造模的1周、2周、4周、6周取材。总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。当前第1页12