本发明属于中药有效成分提取，具体是一种从九龙藤提取总黄酮的方法。
背景技术：
九龙藤系豆科羊蹄甲属植物龙须藤（bauhiniachampionii（benth.）benth.的干燥藤茎，是一种广西民族特色中草药，在我国东南沿海亦有广泛分布，植物资源丰富。其性平、味苦辛、无毒。九龙藤的化学成分主要为黄酮类、甾体类、萜类、多环酚类、木脂素类、生物碱类、芳香酸类等，具有祛风除湿、活血止痛、健脾理气功效，用于风湿关节炎、腰腿痛、跌打损伤、胃及十二指肠溃疡等。其中九龙藤中的总黄酮具有抗氧化、镇痛消炎及抗血小板等作用。因此，有效分离、纯化黄酮活性成分对九龙藤的开发利用具有重要意义。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种从九龙藤提取总黄酮的方法，本发明方法具有工艺简单、总黄酮产量高、纯度高、成本低、容易实现工业化生产等优点，对九龙藤有效成分的开发利用具有重要意义。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎粉碎至40-60目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量6-10倍的乙醇进行回流提取2-3次，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液减压浓缩后，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为10-20%的进样溶液，再用稀酸调节溶液的ph值至4-5；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；
（4）将上述洗脱液再经过减压浓缩，真空干燥，即得到九龙藤总黄酮。
进一步地，所述回流提取温度为50-60℃，每次回流提取1-2h。
进一步地，所述减压浓缩的真空度为-0.06~-0.08mpa、温度为60-70℃。
进一步地，所述稀酸为稀盐酸、稀硫酸或醋酸中的一种或多种组合物。
进一步地，所述丙酮和乙酸乙酯的体积比为2-4:1。
进一步地，所述聚丙烯酰胺和活性炭的质量比为1:3-5。
进一步地，所述真空干燥是真空度为-0.06~-0.08mpa、温度为50-60℃下干燥。
进一步地，所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速50-100ml/min，压力6-8mpa，进样泵流速15-25ml/min，压力6-8mpa，工作温度40-50℃。
与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：
1、本发明方法得到的九龙藤粗提物经过模拟移动床进行分离提纯，大大提高了九龙藤总黄酮的纯度和回收率，总黄酮中以芦丁计纯度可达到75%以上。
2、本发明采用模拟移动床是连续式生产，克服了柱层析间歇性生产存在的缺陷，模拟移动床具有生产自动化程度高、工作效率高、成本较低、生产环境安全环保，容易实现工业化生产。
3、本发明以丙酮和乙酸乙酯作为流动相，以聚丙烯酰胺和活性炭作为固定相，可以更好的实现总黄酮与其他杂质的分离，提高提取物中总黄酮的含量。
4、本发明提取的九龙藤中总黄酮具有抗氧化、镇痛消炎及抗血小板等作用，市场应用前景广阔。
5、本发明方法具有工艺简单、耗能低、安全环保、成本低廉等优点，容易实现工业化生产，为九龙藤药物的开发利用提供了有效的途径。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明方案进一步详细说明，但不限于本发明的保护范围。
实施例1
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎10kg粉碎至40目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量6倍的乙醇进行回流提取3次，回流提取温度为60℃，第一次回流提取2.0h，第二次回流提取1.5h，第三次回流提取1h，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液在真空度为-0.08mpa、温度为60℃下减压浓缩成稠膏状，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为15%的进样溶液，再用稀盐酸调节溶液的ph值至4；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充质量比为1:4的聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为体积比3:1的丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速50ml/min，压力8mpa，进样泵流速20ml/min，压力8mpa，工作温度40℃；
（4）将上述洗脱液在真空度为-0.08mpa、温度为60℃下减压浓缩成稠膏状，真空度为-0.08mpa、温度为60℃下干燥，即得到九龙藤总黄酮。
本实施例所得的金不换总生物碱经过hplc检测，以芦丁计含量为79.16%。
实施例2
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎10kg粉碎至60目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量8倍的乙醇进行回流提取3次，回流提取温度为50℃，第一次回流提取1.5h，第二次回流提取1.0h，第三次回流提取1.0h，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液在真空度为-0.06mpa、温度为70℃下减压浓缩成稠膏状，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为10%的进样溶液，再用稀硫酸调节溶液的ph值至5；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充质量比为1:5的聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为体积比4:1的丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速80ml/min，压力6mpa，进样泵流速15ml/min，压力6mpa，工作温度45℃。
（4）将上述洗脱液在真空度为-0.06mpa、温度为70℃下减压浓缩成稠膏状，真空度为-0.06mpa、温度为55℃下干燥，即得到九龙藤总黄酮。
本实施例所得的金不换总生物碱经过hplc检测，以芦丁计含量为83.64%。
实施例3
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎10kg粉碎至60目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量10倍的乙醇进行回流提取2次，回流提取温度为55℃，第一次回流提取2h，第二次回流提取1.5h，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液在真空度为-0.08mpa、温度为65℃下减压浓缩成稠膏状，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为20%的进样溶液，再用醋酸调节溶液的ph值至4；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充质量比为1:3的聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为体积比2:1的丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速100ml/min，压力6mpa，进样泵流速25ml/min，压力6mpa，工作温度50℃。
（4）将上述洗脱液在真空度为-0.08mpa、温度为65℃下减压浓缩成稠膏状，真空度为-0.08mpa、温度为50℃下干燥，即得到九龙藤总黄酮。
本实施例所得的金不换总生物碱经过hplc检测，以芦丁计含量为76.25%。
实施例4
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎5kg粉碎至60目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量7倍的乙醇进行回流提取2次，回流提取温度为60℃，第一次回流提取1.5h，第二次回流提取1.5h，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液在真空度为-0.06mpa、温度为70℃下减压浓缩成稠膏状，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为15%的进样溶液，再用稀盐酸调节溶液的ph值至5；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充质量比为1:4的聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为体积比4:1的丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速50ml/min，压力8mpa，进样泵流速20ml/min，压力8mpa，工作温度40℃。
（4）将上述洗脱液在真空度为-0.06mpa、温度为70℃下减压浓缩成稠膏状，真空度为-0.06mpa、温度为60℃下干燥，即得到九龙藤总黄酮。
本实施例所得的金不换总生物碱经过hplc检测，以芦丁计含量为78.42%。
实施例5
一种从九龙藤提取总黄酮的方法，包括以下步骤：
（1）将九龙藤根茎5kg粉碎至40目，过筛，每次加入为九龙藤药材重量8倍的乙醇进行回流提取3次，回流提取温度为55℃，第一次回流提取1.5h，第二次回流提取1h，第三次回流提取1h，合并滤液；
（2）将步骤（1）的滤液在真空度为-0.08mpa、温度为60℃下减压浓缩成稠膏状，得九龙藤粗提物，在九龙藤粗提物加入丙酮，配成质量浓度为10%的进样溶液，再用稀盐酸调节溶液的ph值至4；
（3）将进样溶液输送至模拟移动床进行分离纯化，所述移动床的色谱柱填充质量比为1:5的聚丙烯酰胺和活性炭，洗脱剂为体积比3:1的丙酮和乙酸乙酯混合溶剂，得洗脱液；所述利用模拟移动床分离纯化时控制洗脱泵流速80ml/min，压力6mpa，进样泵流速25ml/min，压力6mpa，工作温度50℃；
（4）将上述洗脱液在真空度为-0.08mpa、温度为60℃下减压浓缩成稠膏状，真空度为-0.08mpa、温度为50℃下干燥，即得到九龙藤总黄酮。
本实施例所得的金不换总生物碱经过hplc检测，以芦丁计含量为84.19%。