2h-1-苯并吡喃-2-酮在制备药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及化合物在制备免疫抑制剂及抗炎、抗癌药物方面的应 用。
【背景技术】
[0002] 免疫抑制剂是针对免疫系统具有抑制作用的药物，不同的具体药物分别作用于免 疫反应及免疫调节的不同环节，在临床上可用于自身免疫性疾病的治疗和防止器官移植手 术产生的排斥反应。免疫抑制剂主要分为以下几种：（1)化学制剂类，如烷化剂类的氮芥； ⑵激素类，如糖皮质激素；⑶真菌代谢产物，如环孢素 A(cycl〇Sp〇rinA，CsA) ;(4)中药 及其有效成分。[参考文南犬：Mann，J. Natural products as immunosuppressive agents. Nat. Prod. Rep. 2001，18,417-430.]
[0003] CD268 (BAFF-R)是B细胞活化因子（BAFF)的特异性受体，BAFF属于肿瘤坏死因 子（TNF)家族中的成员，研究发现BAFF在B细胞的成熟和存活、免疫应答、自身免疫性疾病 中发挥重要的作用。BAFF属于II型跨膜蛋白，以同源三聚体的形式发挥生物学作用，BAFF 主要在外周血单个核细胞、淋巴结、脾脏和胸腺中表达。BAFF可通过激活NF- κ B途径介导 B细胞存活，NF-κ B能诱导Bcl-2的生成，而Bcl-2家族成员能控制细胞凋亡进程，进一步 介导自身反应性细胞的生存，产生自身抗体。[参考文献Mackay F，Browning JL. BAFF :a fundamental survival factor for B cells. Nat Rev Tmmunol. 2002 Jul ；2 (7) :465-75.]
[0004] CD86(B7-2)主要表达于抗原递呈细胞：如单核巨噬细胞，树突状细胞（Dentritic cells，DCs)及B细胞等细胞表面，通过与T细胞表面的⑶28分子结合，为T细胞的活化提 供第二信号，促进T细胞增殖分化。初始T细胞表面的CD28与APC上的CD86结合后能够 为T细胞激活提供共刺激信号，可促进T细胞增殖、阻止T细胞凋亡、产生T细胞趋化因子； 可以上调IL-2,增强细胞因子分泌；上调⑶40L表达和CTLA-4的mRNA水平，还可增强T细 胞对超抗原的敏感性，介导CTL对靶细胞的效应功能及介导T、B细胞间的粘附，促进体液 免疫应答等。[参考文献：David M. Sansom. What' s the difference between CD80and CD86Trends in Immunology. 2003,24(6) :313-318.]
[0005] 炎症本身也是一种免疫反应，因此，免疫抑制剂多具有抗炎作用。脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)诱导的RAW264. 7小鼠巨噬细胞是常见研究炎症反应的模 型。巨·细胞在脂多糖LPS刺激下，可促使炎症因子如一氧化氮（nitric oxide，NO)的 分泌。一氧化氮（NO)是细胞之间信息传递的调节因子，具有介导细胞免疫和炎症反应 的作用。当机体发生炎症反应，致炎物质和炎症介质会增加 NO的合成和释放。过量的 NO及其稳定性衍生物过氧亚硝基阴离子对细胞具有毒性作用。[参考文献：Gang Chen， Kai-KaiLi Chak-HeiFung. Er-Miao-San，a traditional herbal formula containing Rhizoma Atractylodis and Cortex Phellodendri inhibits inflammatory mediators in LPS-stimulated RAW264. 7macrophages through inhibition of NF-κB pathway and MAPK sactivation. [J]Journal of Ethnopharmacology. 2014?154? 711-718.]
[0006] Toll样受体做为一种重要的模式识别受体，在生物体免疫反应中，是先天免疫和 后天免疫的纽带。Toll样受体参与生物体的先天性免疫反应和炎症反应，并且在组织修 复方面发挥着重要作用。目前研究发现，TLR4在生物体中具有多种功能。TLR4在体内能 识别外源性或内源性等多种病原相关分子模式，如脂多糖（LPS)，热休克蛋白（heat-shock proteins，HSP)，紫杉醇，肽聚糖等。同时针对不同的病原相关分子模式激活下游不同的免 疫效应。早期研究认为TLRs特异性参与免疫反应，但最新研究表明，在多种肿瘤组织和肿 瘤细胞系中TLR4表达不一致。Kell等研究发现TLR4激活后可以促进肿瘤细胞分泌多种炎 症因子，避免CTL和NK细胞的免疫攻击，造成肿瘤细胞的免疫逃避，促进肿瘤细胞生长；抑 制TLR4的激活则会延缓肿瘤生长[参考文献：KelIy MG，Alvero AB，Chen R，Silasi DA， Abrahams VM，Chan S，et al. TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer[J] · Cancer research，2006,66 :3859-3868. ]〇
[0007] 香豆素是一类重要的杂环化合物，主要存在于天然产物及微生物的代谢产物中。 香豆素衍生物具有良好的活性，广泛的应用于生物、医药、分析、染料及光学领域。实验研究 发现香豆素类化合物具有抗HIV、抗癌、降压、抗心律失常、抗骨质疏松、镇痛、平喘及抗菌等 多种生物活性，具有潜在的药用价值。其中，滨蒿内酯是香豆素的一种，其具有平喘止咳、利 胆、消炎镇痛、降血压、调血脂等多种生物活性。本发明所述化合物为滨蒿内酯的衍生物，具 有免疫抑制，抗炎，抗癌的生物活性。[参考文献：郝光，王振国，付文艳.香豆素类化合物 抗肿瘤作用研究进展[J]中国中药杂志.2008,18,2016-2019.]
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供2H-1-苯并吡喃-2-酮（ADMC)在制备药物中的应用，具体是 在制备免疫抑制剂及抗炎、抗癌药物方面的应用，还包括在制备抑制T、B淋巴细胞增殖的 药物中的应用、在制备促进T、B淋巴细胞凋亡的药物中的应用、在制备抑制T、B淋巴细胞活 化的药物中的应用、在制备抑制TLR4受体表达的药物中的应用、在制备抑制炎性因子N0、 TNF-α分泌的药物中的应用。
[0009] 本发明所研究的2Η-1-苯并吡喃-2-酮的化学结构如下，可通过全合成或半合成 制备得到。合成路线如下：
[0011]分子式：C13H12O5分子量：248
[0012] 本发明通过刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠 T淋巴细胞增殖实验及脂多糖（LPS)诱导 小鼠 B淋巴细胞增殖实验，首次发现2H-1-苯并吡喃-2-酮对T、B淋巴细胞增殖具有抑制 作用；通过PI染色后流式分析，确定其能剂量依赖性的增加 T、B细胞的凋亡，并能降低LPS 诱导的B淋巴细胞表面B细胞活化因子受体（BAFF-R) CD268的表达及髓来源DC细胞和LPS 诱导的原代DC细胞表面共刺激分子CD86的表达，从而抑制T、B细胞活化，能用于未来制备 免疫抑制剂。本发明通过脂多糖（LPS)诱导的巨噬细胞毒性实验，首次发现2H-1-苯并吡 喃-2-酮能通过抑制TLR4的激活对抗脂多糖（LPS)诱导的巨噬细胞损伤，并剂量依赖性的 减少N0、TNF-a的分泌，能用于制备抗炎药物。本发明通过MTT实验，首次发现2H-1-苯并 吡喃-2-酮能抑制胰腺癌细胞系BXPC-3,肝癌细胞系H印G2,宫颈癌细胞系Hela的细胞增 殖，能用于制备抗癌药物，还能用于制备抑制T、B淋巴细胞增殖的药物、用于制备促进T、B 淋巴细胞凋亡的药物、用于制备抑制T、B淋巴细胞活化的药物、用于制备抑制TLR4受体表 达的药物以及用于制备抑制炎性因子NO、TNF- α分泌的药物等。
【附图说明】
[0013] 图I :ADMC样品的HPLC图谱，由图可知，ADMC的出峰时间为7. 7min，且含量最高。 根据各种物质的峰面积求得ADMC的纯度为83. 26 %。
[0014] 图2 :ADMC的1H-NMR图谱，即为化合物ADMC的核磁共振氢谱，由图谱分析各质子 信号的化学位移如下图所示：
[0015]
[0016] 图3 :细胞存活率折线图，为环孢素（CsA)、霉酚酸酯（MMF)、2H-1-苯并吡喃-2-酮 (ADMC)对T、B淋巴细胞生存率的影响，ADMC对