得提取物;其中当归总酚酸的含量不低于45%。
[0058]甘草总黄酮的制备:取适量甘草药材粗粉，用95%乙醇提取2次，乙醇第1次用量为 甘草的8倍量，第2次用量为甘草的6倍量，合并提取液过滤，减压回收乙醇，浓缩物加入5倍 量蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀;将过滤液上AB-8树脂柱，继而以蒸馏水、80%乙醇洗脱树脂 柱，用量分别为4倍量树脂柱体积，收集80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥 得甘草总黄酮提取物;其中甘草总黄酮的含量不低于60%。
[0059]取上述各有效部位研细过60目筛，备用；取硬脂酸甘油酯26.7kg、硬脂酸38kg、白 凡士林45.7kg和液状石蜡38kg加热融化至90°C为油相，另将甘油45.7kg和200L蒸馏水加热 至90°C，再加入十二烷基硫酸钠3.8kg及羟苯乙酯0.4kg溶解为水相，然后在相同温度下将 水相缓缓加入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳剂型基质，将过筛的有效部位加入上述 基质中，搅拌均匀，制成软膏剂。
[0060] 实施例4: 处方:土鳖虫小肽30g熟地黄总多糖40g当归总酚酸30g甘草总黄酮20g 制法:土鳖虫小肽的制备:取土鳖虫药材，粉碎过80目筛，加10倍量水煮沸15 min，待冷 至40°C，以稀盐酸溶液调节pHl. 5~2.0，加入1%土鳖虫量的胃蛋白酶，40°C保温酶解Ih，以 20%氢氧化钠溶液调节pH7.5~8.0，加入1%土鳖虫量的胰蛋白酶，40 °C保温酶解3 h，加热 煮沸15min，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽;其中土鳖虫小肽的含量不低于60%。
[0061 ]熟地黄总多糖的制备:取熟地黄干燥品，加入8倍量的水，于98~100°C中浸提2次， 每次4h，溶液滤过，合并滤液，减压浓缩至相当于生药量0.5mg/mL。加95%的乙醇使醇沉浓度 达到80%，静置24h。抽滤，得粗多糖，再加95%乙醇反复洗涤，脱脂和除去部分单糖。将沉淀放 至无醇味，加水溶解，过滤，定容，减压浓缩，干燥，得熟地黄总多糖;其中熟地黄总多糖的含 量不低于38%。
[0062]当归总酚酸的制备:取适当粉碎的当归药材，加入12倍量70%的乙醇提取3次，每次 Ih，合并提取液，离心，取上清液，减压浓缩，干燥，得醇提取物干粉，加水溶解，离心，取上清 液，用稀盐酸调至PH为3，通过D-101大孔树脂柱，然后用水洗至流出液无色，再用8倍量柱 体积70%的乙醇溶液以4mL/min的流速进行洗脱，收集醇洗脱液，挥干溶剂，干燥得提取物干 粉，用等量的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用少量水洗涤萃取液，分取乙酸乙酯层，挥干 溶剂，干燥得提取物;其中当归总酚酸的含量不低于45%。
[0063]甘草总黄酮的制备:取适量甘草药材粗粉，用95%乙醇提取2次，乙醇第1次用量为 甘草的8倍量，第2次用量为甘草的6倍量，合并提取液过滤，减压回收乙醇，浓缩物加入5倍 量蒸馏水溶解，过滤，弃去沉淀;将过滤液上AB-8树脂柱，继而以蒸馏水、80%乙醇洗脱树脂 柱，用量分别为4倍量树脂柱体积，收集80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥 得甘草总黄酮提取物;其中甘草总黄酮的含量不低于60%。
[0064]取上述各有效部位研细过60目筛，备用；取硬脂酸甘油酯210g、硬脂酸300g、白凡 士林360g和液状石錯300g加热融化至90°C为油相，另将甘油360g和1500mL蒸馏水加热至90 °C，再加入十二烷基硫酸钠30g及羟苯乙酯3g溶解为水相，然后在相同温度下将水相缓缓加 入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳剂型基质，将过筛的有效部位加入上述基质中，搅拌 均匀，制成软膏剂。
[0065] 实施例5: 取实施例1所制的软膏剂治疗80例斑贴试验阴性的患者。治疗方案:外用，根据患者情 况一次取适量均匀涂抹于受试部位，一天三次，15天为一疗程。2个疗程后观察治疗前后色 素斑的颜色深浅变化以及皮肤美白情况。结果:效果显著60例，明显好转12例，无显著变化8 例，总有效率90%。
【主权项】
1. 一种用于祛斑美白的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于是由从土鳖虫提取的 土鳖虫小肽、从熟地黄中提取的熟地黄总多糖、从当归中提取的当归总酚酸和从甘草中提 取的甘草总黄酮组成的，其中，各有效部位的重量配比为： 土鳖虫小肽 2~4重量份 熟地黄总多糖 4~6重量份 当归总酚酸 3~5重量份 甘草总黄酮 1~5重量份。2. 如权利要求1所述的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于各有限部位的重量配 比为:土鳖虫小肽土鳖虫小肽3重量份、熟地黄总多糖5重量份、当归总酚酸4重量份、甘 草总黄酮3重量份。3. 如权利要求1或2所述的土鳖虫小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以 下步骤： ① 土鳖虫小肽的制备：取土鳖虫药材，适当粉碎，加5~20倍量水煮沸5~30 min，待冷 至30 °〇50°C，以稀盐酸溶液调节pHl. 5~2.0，加入0.5%~5%土鳖虫量的胃蛋白酶，30 °0 50°C保温酶解0.5~2h，以15%~25%氢氧化钠溶液调节pH7.5~8.0，加入0.5%~5%土鳖虫量 的胰蛋白酶，40°C保温酶解1~5h，加热煮沸5~30min，减压浓缩，干燥，得土鳖虫小肽;其 中土鳖虫小肽的含量不低于50%~90%; ② 熟地黄总多糖的制备:取熟地黄干燥品，加入5~10倍量的水，于85~100 °C中浸提1~ 3次，每次2~5h，溶液滤过，合并滤液，减压浓缩至相当于生药量0.1~2mg/mL，加80~95%的 乙醇使醇沉浓度达到60%~90%，静置12~48h，抽滤，得粗多糖，再加80~95%乙醇反复洗涤， 脱脂和除去部分单糖，将沉淀放至无醇味，加水溶解，过滤，定容，减压浓缩，干燥，得熟地黄 总多糖;其中熟地黄总多糖的含量不低于30%~50%; ③ 当归总酚酸的制备:取适当粉碎的当归药材，加入5~20倍量70%的乙醇提取1~5次， 每次0.5~3h，合并提取液，离心，取上清液，减压浓缩，干燥，得醇提物干粉，加水溶解，离 心，取上清液，用稀盐酸调至PH2~4,通过D-101大孔树脂柱，然后用水洗至流出液无色，再用 浓度为60%~80%的乙醇溶液以2~5mL/min的流速进行洗脱，每次用量为6~10倍量树脂柱体 积，收集醇洗液，挥干溶剂，干燥得提取物干粉，用等量的乙酸乙酯萃取1~4次，合并萃取 液，用少量水洗涤萃取液，分取乙酸乙酯层，挥干溶剂，干燥得提取物;其中当归总酚酸的含 量不低于30%~60%; ④ 甘草总黄酮的制备：取适量甘草药材粗粉，用95%乙醇提取1~3次，每次乙醇的用量 为3~10倍量，合并提取液过滤，减压回收乙醇，浓缩物加入3~8倍量蒸馏水溶解，过滤，弃去 沉淀;将过滤液上AB-8树脂柱，继而以蒸馏水、80%乙醇洗脱树脂柱，用量分别为2~5倍量树 脂柱体积，收集80%乙醇洗脱部位，减压回收乙醇，浓缩物真空干燥得甘草总黄酮提取物;其 中甘草总黄酮的含量不低于50%~70%; ⑤ 按照各有效部位的重量配比取上述四份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅 料，制成药学上可以接受的剂型。4. 权利要求1或2所述的土鳖虫小肽有效部位组合物用于治疗色素斑，美白皮肤，减少 色素生成。
【专利摘要】本发明公开了一种用于祛斑美白的土鳖虫生物活性小肽有效部位组合物，属于中药领域。该组合物是由从土鳖虫中提取的土鳖虫小肽、从熟地黄中提取的熟地黄总多糖、从当归中提取的当归总酚酸和从甘草中提取的甘草总黄酮按一定配比组成，加入药剂学常规辅料，制成各种剂型，临床可用于治疗色素斑，美白皮肤，减少色素生成。
【IPC分类】A61K36/804, A61K38/01, A61P17/00, A61K35/64
【公开号】CN105561285
【申请号】CN201610020149
【发明人】代龙, 刘国飞, 刘元涛
【申请人】安徽生物肽产业研究院有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月13日