注、细胞毒性药物/细胞抑 制药物和乙酰氨基酚中毒，但它不保护猪心脏免受缺血-再灌注引起的心肌梗死(Karlsson 等，2001 )，从中可得出结论，MnDPDP的体内细胞保护作用是完整的锰配合物的固有特性。
[0061] 因此，根据本发明添加不含锰配合物化合物（例如DPDP)以稳定锰化合物（例如 MnDPDP)或其去磷酸化物防止锰释放提供了另一个重要的优点，即提高疗效。例如，当静脉 内注射临床相关成像剂量的MnDPDP(5-10ymol/kg)时，超过80%的最初与DPDP结合的锰被 释放出来，有利于成像效果。因此，低于20 %的锰仍然与DPDP或其去磷酸化物结合，有利于 MnDPDP的治疗活性。根据本发明，如实施例1所示，当通过向所施用的MnDPDP中添加 DPDP使 从配合物中释放出来的锰的量从85 %降低至70%时，约30 %注射剂量的MnDPDP将有利于治 疗活性，从而使可获得治疗效果的Mn-螯合物的量加倍。在锰的释放主要由所添加的DPDP决 定的情况下，这意味着，在存在所添加的DPDP的情况下，为了获得相等的治疗效果MnDPDP的 剂量可减少50%。然而，如下文所讨论的，在某些实施方案中，在更低的并且治疗更相关的 MnDPDP剂量下，所添加的DPDP的效果甚至会更加突出。反过来，这意味着向MnDPDP中添加 DPDP将对MnDPDP的毒理潜力具有显著的影响。
[0062]锌存在于所有机体组织和体液中。据估计，人体总锌含量为2-3g(F〇lin等， BioMetals 1994;7:75-79)。血浆锌占机体总锌含量的约0.1%，并且施用后主要是这一小 部分锌与锰竞争结合DPDP或其去磷酸化物DPMP和PLED。人体具有通过胃肠道吸收和排泄的 协同调节来维持锌的动态平衡的非常高的能力(King等，J Nutr 2000; 130:1360S-1366S)。 因此，反复注射含过量DPDP的临床相关剂量的MnDPDP而引起缺锌的风险并不存在或者风险 非常低。在具有任何缺锌倾向的情况下，该问题可通过在施用MnDPDP之间的膳食补锌而容 易地解决。
[0063]由临床前工作（Southon等，1997)和临床工作（Skjold等，2004)可见，推测体内含 有10-20ymol/kg体重(b.w.)的易于与MnPLED衍生物（例如MnDPDP)中的锰交换的锌是合理 的。这实际上与血浆锌含量是一致的（见上文KPLED衍生物(例如DPDP)每分子含有一个锰/ 锌结合位点。因此，鉴于对锌的亲和力比对所述螯合剂的高1 〇〇〇倍，在本发明的一个实施方 案中，向MnPLED衍生物制剂(例如MnDPDP制剂）中添加剂量为l-lOOymol/kg体重的不含锰的 化合物(例如DPDP)将防止患者施用后释放锰。
[0064]临床前工作表明，MnDPDP静脉内施用的剂量范围为l-30ymol/kg体重时降低多柔 比星诱导的小鼠心肌病和猪心肌梗死（参见EP 0910360、US 6147094、EP 0936915、US 6258828、Karlsson等，2001年；Towart等，1998)。其它MnPLED衍生物在不同剂量水平时显示 出效力，并且比上述剂量区间低10-100倍的剂量落在本发明的药物组合物和方法的范围内 (EP 0910360、US 6147094)。考虑到物种间的差异、各种MnPLED衍生物之间效力的差异，体 表和不同施用途径的差异，当施用给患者时，根据本发明的一个具体实施方案的第一组分 的合适剂量范围将为约Ο.ΟΙ-ΙΟμ mol/kg体重，并且根据本发明的一个具体实施方案的第二 组分的合适剂量范围将为约l-lOOymol/kg体重。在一个更具体的实施方案中，所述第二组 分以相对于所述第一组分等摩尔或更大的量施用，并且范围为约l-20wii 〇l/kg体重。在又一 个具体的实施方案中，所述第一组分以约l-2wii〇l/kg体重的量施用。
[0065]所述药物组合物可以是包含所述第一组分（即所述Mn-PLED衍生物)和所述第二组 分（即所述PLED衍生物）的即用型制剂，或者所述药物组合物可包含分开的但存在于组合施 用的相关包装中的所述第一组分和所述第二组分。在这方面，所述第一组分和所述第二组 分可组合或单独、同时或依次施用。
[0066]任选地，本发明的药物组合物可包含一种或更多种生理学上可接受的载体和/或 赋形剂，其形式为本领域技术人员众所周知的。在一个实施方案中，式I化合物可例如混悬 或溶在任选地添加有药学上可接受的赋形剂的含水介质中。适用于所述药物组合物的赋形 剂包括任何常规药用或兽用制剂赋形剂，包括但不仅限于稳定剂、抗氧化剂、渗透压调节 剂、缓冲剂、PH调节剂、粘合剂、填充剂等。所述药物组合物可以是适于施用的形式，包括但 不限于胃肠外或肠内施用。在一个具体的实施方案中，所述组合物是适于例如注射或输注 的形式。因此，本发明的药物组合物可以是常规的药物施用形式，例如片剂、胶囊剂、粉末、 溶液剂、混悬剂、分散体、糖浆剂、栓剂等。
[0067]本发明的药物组合可以多种途径施用，例如口服、经皮、直肠、鞘内 (intrathecally)、表面(topically)或通过吸入或注射的方式，特别是皮下、肌内、腹膜内 或血管内注射。也可采用其它施用途径，包括鼓室内，并且提高产品疗效、生物利用度或耐 受性的途径是优选的。可根据所用的具体制剂由本领域技术人员选择最合适的途径。
[0068]如上文所述，可施用所述组合物用于患者病理状况的治疗性处理，特别是在其中 已知使用Mn配合物的任何方法中。在一个具体实施方案中，可施用所述组合物用于人患者 或其他哺乳动物中病理状况的治疗性处理。在另一个具体实施方案中，施用本发明的组合 物用于治疗由于氧衍生自由基的存在（即氧化应激）引起的病理状况。在一个实施方案中， 所述药物组合物用在细胞毒或细胞抑制药物的治疗中，其中施用MnPLED衍生物以提供免受 细胞毒素/细胞抑制药物的不利副作用(例如在癌症患者中）。在一个更具体的实施方案中， 所述细胞毒或细胞抑制药物包括多柔比星、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶或紫杉醇中的至少一种。 本发明的方法还可包括但不限于对以下疾病的治疗：乙酰氨基酚诱导的肝衰竭，缺血性心 脏病(包括在急性和选择性情况下的缺血-再灌注引起的损伤或心肌缺血-再灌注引起的损 伤），与溶栓治疗相关的病症，心肺分流术(cardiopulmonary bypass)，或经皮腔内血管成 形术，或者是心脏或器官移植手术的结果，铁过载(例如地中海贫血、镰状细胞贫血或输血 性含铁血黄素沉着症），肝炎引起的肝硬化，辐射诱导的损伤（例如由放射治疗引起的损 伤），各种神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、帕金森病和多 发性硬化症等。
[0069] 通过下文的实施例举例说明本发明的药物组合物和治疗方法方面的各个实施方 案。
[0070] 实施例1
[0071] 本实施例测量仅接受MnDPDP的动物和接受MnDPDP和DPDP的动物的尿液中Mn排泄。 [0072] 方法
[0073] 经尾静脉之一给14只雄性Wistar大鼠（约250g)静脉内注射0.25ml IOmM的MnDPDP 制剂(Teslascan?，锰福地吡(mangafodipir)，GE医疗集团）。这些大鼠中7只仅接受MnDPDP (MnDPDP)，而其它7只除了接受MnDPDP之外还接受0.5ml IOmM的DPDP制剂(MnDPDP+DH)P)。 注射后，立即将大鼠置于代谢笼中，收集0-24小时时间段内的尿液。为了获得尿液中锰(Mn) 的基础含量，将另外两只（对照）大鼠置于代谢笼中收集相同时间段内的尿液。然后将尿液 样品储存在-80°C直到进行Mn分析。分析之前，将样品解冻，用力摇动以获得均匀样品。从每 个样品中取出5毫升的等分样，加入5毫升浓硝酸。然后将样品于微波炉中溶解，随后用蒸馏 水稀释至终体积为50ml。通过ICP-MS(电感耦合等离子体质谱)分析每个样品的锰含量。抽 取与注射给大鼠的相同的该MnDPDP样品（即0.5ml)并注射到试管中。以与尿样相同的方式 处理该样品并分析其锰含量。结果以0-24小时尿液中总锰含量(表示为μπιο?/kg土S.E.M.) 和注射剂量的百分数（土S.E.M.)表示。就锰排泄到尿液中而言，用未配对t检验检验了仅接 受MnDPDP的动物与接受MnDPDP和DPDP的动物之间的统计学差异。小于0.05的p值被视为有 统计学显著性差异。
[0074] 结果
[0075] 结果如图IA和IB所示。0.25ml MnDPDP样品（与注射的MnDPDP剂量相等)含有2.24μ mol Mn，相当于250g大鼠的剂量为8.96ymol/kg体重。2只对照大鼠的0-24小时尿液分别含 有0.49e5和0.357ymol (Mn)/kg体重(平均值=0.426ymol/kg体重）。仅注射MnDPDP的大鼠的 0-24小时尿液最小基础水平（0.426ymol/kg体重）含有1.41±0.1(^111〇1/1^体重，而注射 MnDPDP和DPDP的大鼠的尿液含有显著更高量的Mn，为2.73±0.18ymol/kg体重（图1A)。这些 值相当于〇_24h尿液中排泄15.7±1.1%和30.5±2.0%(图1B)。因此，加入DPDP使尿液中Mn 排泄加倍。静脉内注射单独的MnDPDP后0-24小时尿液中排泄的Mn百分数与之前报道的大鼠 (Hustvedt等，Acta Radiol 1997; 38:690-699)和人（Toft等，1997)中的数据非常一致。本 发明的结果表明，加入DPDP使MnDPDP在体内条件下稳定而避免释放Μη。这提供了几个显著 的优点，因为能被脑摄入的游离Mn的量降低并且由于体内存在更多的治疗性MnDPDP而使 MnDPDP的治疗指数提高。因此，本发明的组合物和方法使MnPLED衍生物治疗的毒性大大降 低。
[0076] 实施例1表明，加入DPDP使Mn排泄从约15% (施用剂量ΙΟμ mol/kg体重MnDPDP)增加
至约30%，相当于增加了约100%。在较低的MnDPDP剂量(例如2ymol/kg体重）下，预计相对 增加大大提高，因为预计在不存在DPDP的情形下更大百分数的Mn被置换。也就是说，静脉内 施用剂量为lOymol/kg体重时，约80%的与DPDP结合的锰被锌置换(Tof t等，1997)。当施用 更小剂量(例如卜2μπι〇Ι/kg体重）的MnDPDP时，解离的锰的百分数甚至更大，因为在这样的 低剂量下血浆锌以相对高的足以"置换"几乎所有与DPDP结合的Mn的浓度存在。该解离如下 所示：
[0077] 8
[0078]因此，预计加入DPDP所获得的Mn排泄的相对增加远高于100%。在较低MnDPDP剂量 下过剩DPDP的这种增强作用实际上是显著和出乎意料的。该有益作用同样可通过其它 MnPLED衍生物与PLED衍生物的组合来实现。
[0079] 实施例2
[0080] 本实施例测量仅接受MnDPDP的动物和接受MnDPDP和DPDP的动物的脑中Mn含量。 [0081 ] 方法
[0082] 经尾静脉之一给8只雄性Wistar大鼠（约250g)静脉内注射0.25ml IOmM的MnDPDP 制剂(Tes lascan?)。这些大鼠中4只仅接受MnDPDP (MnDPDP )，而其它4只除了接受MnDPDP之 外还接受0.5ml IOmM的DPDP制剂(MnDPDP+DTOP)。为了获得大鼠脑中锰(Mn)的基础含量，将 另外两只（对照）大鼠作为平行对照。24小时后，处死大鼠，剥离出脑并储存在-80°C直到Mn 分析。分析之前，将每个脑于微波炉中溶解在5ml浓硝酸加3ml蒸馏水中，其后用蒸馏水稀释 至最终体积为50ml。通过IC