吡啶胺基嘧啶衍生物的盐及其制备方法和应用与流程

本发明涉及吡啶胺基嘧啶衍生物的盐，具体的说，本发明涉及n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的甲磺酸盐、其制备方法、包含该盐的药物组合物及该盐在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症中的应用。
背景技术：
：表皮生长因子受体(egfr)被确认为是在细胞生长和增值过程中至关重要的驱动因素。表皮生长因子受体家族由egfr(erb-b1)、erb-b2(her-2/neu)、erb-b3和erb-b4组成。表皮生长因子受体与大部分癌症的疾病进程有关，如肺癌、结肠癌、乳腺癌等。egfr的过度表达和突变已被明确证实是预后不好的乳腺癌的主要危险因素。目前，研究前沿的已经是不可逆的第三代egfr抑制剂。专利申请cn201410365911.4公开如下式(i)结构化合物，该化合物对egfr激活型突变(如19号外显子缺失激活突变、或l858r激活突变)和t790m耐药型突变的抑制活性显著高于对野生型egfr(wtegfr)的抑制活性，有很好的选择性，并且毒副作用较低，安全性好。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供式(i)化合物的甲磺酸盐、其制备方法，包含该盐的药物组合物及该盐在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症中的应用。本发明提供了式(i)化合物的甲磺酸盐。本发明提供了式(i)化合物的甲磺酸盐的制备方法。本发明进一步提供了式(i)化合物的甲磺酸盐的制备方法，包括在溶剂当中将式(i)化合物直接与甲磺酸反应得到。本发明提供了药物组合物，包括式(i)化合物的甲磺酸盐及药学上可接受的载体。本发明进一步提供药物组合物，包括式(i)化合物的甲磺酸盐，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。本发明提供了用作抗肿瘤药物的式(i)化合物的甲磺酸盐。本发明还提供式(i)化合物的甲磺酸盐在制备治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物的甲磺酸盐在制备治疗癌症的药物中的用途。本发明还提供式(i)化合物的甲磺酸盐在治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症方面中的用途。本发明还提供含有式(i)化合物的甲磺酸盐的药物组合物在制备治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的药物中的用途。本发明还提供含有式(i)化合物的甲磺酸盐的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。本发明还提供一种治疗哺乳动物尤其人类由egfr激活型或耐药型突变体介导的疾病、特别是癌症的方法，所述方法包括对患者施用式(i)化合物的甲磺酸盐、或包括治疗有效量的式(i)化合物的甲磺酸盐和药物可接受载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明还提供一种治疗癌症的方法，所述方法包括对患者施用式(i)化合物的甲磺酸盐、或包括治疗有效量的式(i)化合物的甲磺酸盐和药物可接受载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。本发明所提及癌症包括但不限于，例如肺癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肝细胞癌、胃肠道基质瘤(gist)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(aml)、多发性骨髓瘤、间皮瘤，尤其对于表皮生长因子受体790位苏氨酸突变为蛋氨酸(egfrt790m)的肿瘤类型有更好的应用。举例来说，本发明式(i)化合物的甲磺酸盐可作为和用于治疗非小细胞癌(egfrt790m)的药物。本发明提供的式(i)化合物的制备方法如下，该方法是参考专利申请cn201410365911.4实施例1的方法，其中中间体1c与中间体2a的制备是直接引用专利申请cn201410365911.4的实施例。由间体1c与中间体2a经取代或偶联反应得到化合物(ii)，化合物(ii)硝基被还原得到化合物(iii)，化合物(iii)与丙烯酰氯经酰化得到化合物(i)。中间体1c与中间体2a取代或偶联反应包括也可以在过渡金属催化剂催化下进行，所述过渡金属催化剂包括但不限于三(二亚苄基丙酮)二钯/4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽；还原硝基的方法采用本领域中公知的常规还原剂，包括但不限于铁粉、锌粉、硫化钠、h2/二氧化铂。本发明提供的式(i)化合物的甲磺酸盐的制备方法如下：在溶剂中式(i)化合物直接与甲磺酸反应成盐得到式(i)化合物的甲磺酸盐，所述溶剂包括但不限于丙酮与水的混合溶剂。本发明的式(i)化合物的甲磺酸盐可给药于哺乳动物包括人，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)、或瘤内给药。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐的给药剂量可以大约为0.05～50mg/kg体重/天，例如0.1～45mg/kg体重/天，更例如0.5～35mg/kg体重/天。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐可以配制为用于口服给药的固体剂型，包括，但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂等。在这些固体剂型中，本发明式(i)化合物的甲磺酸盐作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(1)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，例如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶等；(3)保湿剂，例如，甘油等；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，例如石蜡等；(6)吸收加速剂，例如，季铵化合物等；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，例如，高岭土等；和(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中也可包含缓冲剂。所述固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材料例如肠溶衣和其他本领域公知的材料进行包衣或微囊化。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括，但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酊剂等。除了作为活性成分的式(i)化合物的甲磺酸盐外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水和其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包含常规助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。所述悬浮剂包括，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇只、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂等或这些物质的混合物。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐可以配制为用于肠胃外注射的剂型，包括，但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。本发明化合物或其药学上可接受的盐也可以配制为用于局部给药的剂型，包括如软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂等。作为活性成分的本发明式(i)化合物的甲磺酸盐在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。本发明还提供药物组合物，它含有本发明式(i)化合物的甲磺酸盐，以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。在制备药物组合物时，通常是将本发明式(i)化合物的甲磺酸盐与药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂混合。可以按常规制备方法将所述本发明组合物配制为常规药物制剂。例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、乳液剂、混浮剂、分散液、溶液剂、糖浆剂、酏剂、软膏剂、滴剂、栓剂、吸入剂、喷射剂等。本发明所述的式(i)化合物的甲磺酸盐可以单独给药，或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特别是与其他抗肿瘤药物组合。所述治疗剂包括但不限于：作用于dna化学结构的药物抗肿瘤药如顺铂，影响核苷酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(mtx)、5-氟尿嘧啶(5fu)等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)等。待组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或以不用制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明化合物和一种其他活性剂的组合，而且也包括本发明化合物和两种或更多种其他活性剂的组合。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐灌胃给药的绝对生物利用度的测定方法如下：静脉给药：健康sd大鼠，随机分组。测试化合物按一定剂量d静脉给药，于给药前及给药后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h经眼球后静脉丛取血，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。灌胃给药：健康sd大鼠，随机分组。测试物质按一定剂量d灌胃给药，于给药前和给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。经剂量校正，按药时曲线下面积(auc0-t)计算，得到绝对生物利用度f，计算公式f＝(auc灌胃×d静脉)/(auc静脉×d灌胃)×100％。本发明式(i)化合物的甲磺酸盐抑制动物移植瘤生长的药效可用常规方法测定，一种优选的评价方法为对人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用。实验方法：人肺癌h1975细胞株(5×106个/只)接种于裸小鼠右侧背部皮下。待肿瘤生长至平均(100～150)mm3时根据肿瘤大小和小鼠体重随机分组。测试化合物按一定剂量灌胃给药，溶剂对照组灌胃给予等量溶剂，每天给药一次，连续给药21天。整个实验过程中，每周测量两次小鼠的体重和肿瘤的大小，观察是否出现毒性反应。肿瘤体积的计算公式为：肿瘤体积(mm3)＝0.5×(肿瘤长径×肿瘤短径2)。本发明的有益效果为：本发明提供的式(i)化合物的甲磺酸盐在动物体内具有优异的生物利用度。本发明提供的式(i)化合物的甲磺酸盐能更好的抑制动物移植瘤的生长，并显示良好的安全性。附图说明附图1是实施例2制备得到式(i)化合物的甲磺酸盐和对照例2物质(即专利申请cn201410365911.4实施例16)在25mg/kg给药剂量下的人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的肿瘤体积变化曲线。附图2是实施例2制备得到式(i)化合物的甲磺酸盐和对照例2物质(即专利申请cn201410365911.4实施例16)在25mg/kg给药剂量下的人肺癌h1975裸小鼠的体重变化曲线。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于举例说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比分别为重量份和重量百分比。具体实施方式i.制备实施例实施例1：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺中间体1c：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺，制备方法引用专利申请cn201410365911.4实施例中间体2a：3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚，制备方法引用专利申请cn201410365911.4实施例化合物(ii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺的合成在圆底烧瓶中加入3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1h-吲哚(73mg，0.3mmol)、n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-3-硝基吡啶-2，5-二胺(100mg，0.3mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(14mg，0.015mmol)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(14mg，0.03mmol)，磷酸钾(127mg，0.6mmol)和8ml二氧六环，氩气保护下，95℃反应5h。过滤，滤液减压蒸干，硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)，得到140mg产物。收率为86％。msm/z：545[m+1]。化合物(iii)：n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺的合成在圆底烧瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-3-硝基吡啶-2，5-二胺(150mg，0.27mmol)、二氧化铂(60mg)和10ml甲醇，通入氢气，室温反应1h。过滤，制备板分离(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到80mg目标化合物。收率为56％。msm/z：515[m+1]。化合物(i)：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺的合成向圆底烧瓶中加入n2-甲基-n2-[2-(二甲胺基)乙基]-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-n5-[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]吡啶-2，3，5-三胺(80mg，0.16mmol)和5ml二氯甲烷，冰水浴冷却，加入0.5n丙烯酰氯的二氯甲烷溶液(0.5ml，0.25mmol)。冰水浴下反应1.5小时，反应液用50ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，制备板分离纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到20mg目标产物。收率为23％。msm/z：569[m+1]。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.41(s，1h)，10.27(s，1h)，8.68(s，1h)，8.44(s，1h)，8.28(t，j＝8.5hz，2h)，8.18(s，1h)，7.52(d，j＝8.0hz，1h)，7.29-7.14(m，3h)，6.98(s，1h)，6.28(d，j＝17.1hz，1h)，5.76(d，j＝10.4hz，1h)，5.00(q，j＝9.0hz，2h)，3.89(s，3h)，3.61(s，2h)，3.28(s，2h)，2.80(s，3h)，2.73(s，6h)。其中化合物(ii)、(iii)、(i)的制备方法参考专利申请cn201410365911.4实施例1。实施例2：n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺甲磺酸盐的合成在三口瓶中加入n-{2-{[2-(二甲胺基)乙基](甲基)胺基}-6-(2，2，2-三氟乙氧基)-5-{[4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]胺基}吡啶-3-基}丙烯酰胺1g(1.76mmol)，35ml丙酮，7ml水，169mg甲烷磺酸，50℃加热至全溶。减压蒸干，加入乙腈，再减压蒸干。向残留物中加入丙酮，超声，过滤，滤饼烘干得到685mg目标产物。收率为59％。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.80(s，1h)，9.23(s，1h)，8.53(s，1h)，8.42(s，1h)，8.30(d，j＝5.4hz，2h)，8.23(s，1h)，7.52(d，j＝8.2hz，1h)，7.25(t，j＝7.2hz，1h)，7.22(d，j＝8.0hz，1h)，7.15(t，j＝7.4hz，1h)，6.70(dd，j＝17.0，10.2hz，1h)，6.34(dd，j＝17.0，1.7hz，1h)，5.83(dd，j＝10.3，1.6hz，1h)，5.02(q，j＝9.1hz，2h)，3.88(s，3h)，3.65(t，j＝6.0hz，2h)，3.33(t，j＝6.0hz，2h)，2.86(s，6h)，2.81(s，3h)，2.44(s，3h)。ii.活性测试实施例测试实施例1：sd大鼠(spraguedawley大鼠)药物吸收实验静脉给药：健康sd大鼠，雌雄各半共16只，体重200～280g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，随机分成四组。分别按下表所列剂量静脉给予上述实施例1、实施例2、对照例1和对照例2的物质，于给药前及给药后5min、15min、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、8.0h、12h和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.2ml，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。其主要的药物动力学参数如下表1所示：参数实施例1实施例2对照例1对照例2剂量d(mg/kg)2.54.03.04.0cmax(ng/ml)81.3429.7327.5630.2auc0-t(ng·h/ml)307.3405.9437.8810.7t1/2(h)3.963.132.721.71表1表1中，对照例1物质结构如下，按专利申请cn201410365911.4实施例2方法制备得到，对照例2物质结构如下，按专利申请cn201410365911.4实施例16方法制备得到，t1/2：消除半衰期；cmax：血浆中药物的最高浓度；auc0-t：药时曲线下面积灌胃给药：健康sd大鼠，雌雄各半共16只，体重200～280g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，随机分成四组。分别按下表所列剂量灌胃给予上述实施例1、实施例2、对照例1和对照例2的物质，于给药前和给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10、12和24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血0.2ml，分离制备血浆，采用液相色谱/串联质谱法测定血浆中药物的浓度，得到药物浓度-时间曲线。其主要的药物动力学参数如下表2所示：参数实施例1实施例2对照例1对照例2剂量d(mg/kg)1010610cmax(ng/ml)17.644.5412.6328.3auc0-t(ng·h/ml)231.728777.66172.2t1/2(h)4.148.338.605.76f(％)18.8528.288.98.5表2，其中对照例1、2的结构与制备方法同表1经剂量校正后，按auc0-t计算，得到绝对生物利用度f，计算公式f＝(auc灌胃×d静脉)/(auc静脉×d灌胃)×100％，得到的绝对生物利用度f见上表2。结论：实施例2的式(i)化合物的甲磺酸盐灌胃给药的绝对生物利用度最高达到28.28％，明显优于实施例1式(i)化合物、对照例1和对照例2灌胃给药的绝对生物利用度。测试实施例2：对人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生长抑制作用观察本发明实施例2制备得到的式(i)化合物的甲磺酸盐和对照例2物质(对照例2的结构如下，制备方法参考专利申请cn201410365911.4实施例16)对人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的抑制作用。细胞培养：h1975培养在加有10％fbs的rpmi-1640培养基中培养，放在37℃含有5％co2的恒温培养箱中培养。收取指数生长期的细胞并计数，以供接种。实验动物：balb/cnude裸鼠，15只，雄性，6周，18-20g，每组5只，购自上海动物实验中心。设3个实验组，分别为：0.5％羧甲基纤维素钠溶剂对照组，实施例2(25mg/kg)组与对照例2(25mg/kg)组。实验方法：人肺癌h1975细胞株(5×106个/只)接种于实验小鼠于右侧背部皮下，定期观察肿瘤生长情况，用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均(100～150)mm3时根据肿瘤大小和小鼠体重随机分组。实施例2与对照例2的物质各自按25mg/kg灌胃给药，溶剂对照组灌胃给予等量溶剂，每天给药一次，连续21天。整个实验过程中，每周测量两次小鼠的体重和肿瘤的大小，观察是否出现毒性反应。肿瘤体积计算公式：肿瘤体积(mm3)＝0.5×(肿瘤长径×肿瘤短径2)。三个实验组肿瘤增长生长曲线见附图1，体重曲线见附图2。结论：本发明实施例2的式(i)化合物的甲磺酸盐对人肺癌h1975裸小鼠皮下移植瘤的生长具有良好的抑制作用，抑制效果明显优于对照例2；并且显示良好的安全性。在本文中提及的所有文献均通过引用被并入本申请中。此外还应指明的是，在阅读了本申请的上述公开内容之后，本领域技术人员可以无需背离本发明的精神和范围，对本发明作出各种修饰、改动或修改，但这些变化形式同样都应落于本申请所附权利要求书所记载的范围。当前第1页12