靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的sgRNA、基因载体及其应用的制作方法

文档序号:11126037阅读:来源:国知局

技术特征:

1.靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的sgRNA,其特征在于:该抑制膀胱癌的sgRNA包括在CRISPR-Cas9特异性修饰lncRNA-UCA1基因中可特异性靶向人lncRNA-UCA1基因的sgRNA,该sgRNA的序列如SEQ.ID.NO.4或SEQ.ID.NO.5所示。

2.靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体,其特征在于:该基因载体选自重组质粒pGL3-U6-UCA1 sgl、pGL3-U6-UCA1 sg2中的一种,pGL3-U6-UCA1 sgl由序列如SEQ.ID.NO.4所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,pGL3-U6-UCA1 sg2由序列如SEQ.ID.NO.5所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,通过连接使SEQ.ID.NO.4或SEQ.ID.NO.5所示序列插入至pGL3-U6-sgRNA质粒的多克隆位点内,或者,该基因载体为构建于用于表达核酸酶Cas9的质粒基础上的重组质粒,所述用于表达核酸酶Cas9的质粒的多克隆位点内分别插入有如SEQ.ID.NO.4、SEQ.ID.NO.5所示序列中的一种或两种。

3.靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物,其特征在于:该组合物包括pGL3-U6-UCA1 sg质粒,所述pGL3-U6-UCA1 sg质粒选自重组质粒pGL3-U6-UCA1 sgl、pGL3-U6-UCA1 sg2中的一种或两种,pGL3-U6-UCA1 sgl由序列如SEQ.ID.NO.4所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,pGL3-U6-UCA1 sg2由序列如SEQ.ID.NO.5所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,通过连接使SEQ.ID.NO.4或SEQ.ID.NO.5所示序列插入至pGL3-U6-sgRNA质粒的多克隆位点内。

4.如权利要求3所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物,其特征在于:所述pGL3-U6-UCA1 sgl与pGL3-U6-UCA1 sg2的质量比为(1~2):(1~2)。

5.如权利要求3所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物,其特征在于:所述组合物还包括pGL3-U6-PD1 sg质粒,所述pGL3-U6-PD1 sg质粒选自重组质粒pGL3-U6-PD1-1 sg、pGL3-U6-PD1-2 sg中的一种或两种,pGL3-U6-PD1-1 sg由序列如SEQ.ID.NO.6所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,pGL3-U6-PD1-2 sg由序列如SEQ.ID.NO.7所示的sgRNA的寡聚核苷酸双链与线性化pGL3-U6-sgRNA质粒连接获得,通过连接使SEQ.ID.NO.6或SEQ.ID.NO.7所示序列插入至pGL3-U6-sgRNA质粒的多克隆位点内。

6.如权利要求5所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物,其特征在于:所述pGL3-U6-UCA1 sg质粒与pGL3-U6-PD1 sg质粒的质量比为(1~3):(1~2);所述pGL3-U6-PD1-1 sg与pGL3-U6-PD1-2 sg的质量比为(1~2):(1~2)。

7.如权利要求3或5所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物,其特征在于:所述组合物还包括用于表达核酸酶Cas9的质粒,所述用于表达核酸酶Cas9的质粒:pGL3-U6-UCA1 sg质粒的质量比为(1~4):(1~3),所述用于表达核酸酶Cas9的质粒:pGL3-U6-UCA1 sg质粒:pGL3-U6-PD1 sg质粒的质量比为(1~4):(1~3):(1~2)。

8.如权利要求1所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的sgRNA在制备用于治疗人膀胱癌的药物中的应用。

9.如权利要求3或5所述靶向人lncRNA-UCA1抑制膀胱癌的基因载体组合物在制备用于治疗人膀胱癌的药物中的应用。

10.可特异性靶向人PD-1基因的sgRNA在制备用于治疗人膀胱癌的药物中的应用,所述的应用包括仅使用所述可特异性靶向人PD-1基因的sgRNA或者与可特异性靶向人lncRNA-UCA1基因的sgRNA联合使用。

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