一种原多甲藻酸毒素的产毒藻及其标准样品的制备与应用的制作方法

文档序号:11837126阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种原多甲藻酸毒素的产毒藻,于2016年4月8日保藏于中国典型微生物保藏中心,分类命名为:Azadinium poporum AZDY06,生物保藏号为CCTCC NO:M 2016181。

2.利用权利要求1所述产毒藻制备原多甲藻酸毒素标准样品的方法,其特征在于它包括步骤如下:

(1)从培养的原多甲藻酸毒素产毒藻、原多甲藻酸毒素产毒藻培养液或摄食原多甲藻酸毒素产毒藻之后的贝类阳性样品中提取原多甲藻酸毒素,获得粗提毒素提取液;

(2)将步骤(1)所述粗提毒素提取液用硅胶柱和快速色谱柱进行净化,硅胶柱用的洗脱液分别用正己烷、乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇混合溶液;快速色谱柱的洗脱液为乙腈/H2O的混合液;

(3)将步骤(2)净化后的样品过高效液相色谱柱,用含0.1%(体积比)甲酸的乙腈/水混合液进行洗脱,收集目标色谱峰,冷冻干燥,制得白色固体标准样品;

将上述标准样品进行定性,分析纯度并定量;

检验所述标准样品的均匀性和稳定性。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于步骤(1)中从原多甲藻酸毒素产毒藻中提取毒素的方法:将海水抽提过滤后,灭菌,加入2/f培养基,接种原多甲藻酸毒素产毒藻,培养条件为温度:20℃,光照强度:60%,光暗比为12h:12h,用玻璃纤维滤膜收集指数期藻细胞,所述的指数期为藻细胞>107cells/L;将上述藻细胞用丙酮溶解,超声细胞破碎,然后超滤离心,收集上清液。

4.根据权利要求2所述方法,其特征在于所述步骤(1)从原多甲藻酸毒素产毒藻培养液中提取原多甲藻酸毒素的方法:用大孔吸附树脂富集上述产毒藻培养液中AZA毒素,减压旋蒸至干,用乙酸乙酯与氯化钠水溶液进行液相分散萃取后,所述乙酸乙酯与氯化钠水溶液体积比为3:1,取出乙酸乙酯层,旋蒸至干后加入乙酸乙酯溶解,备用。

5.根据权利要求2所述方法,其特征在于所述步骤(1)从贝类阳性样品中提取原多甲藻酸毒素的方法:取出干净的可食部分贝肉,在筛子上平铺沥水5min,然后将贝肉均质、混匀,用10倍体积纯甲醇分两次提取样品后,离心,收集上清液,50℃旋蒸浓缩至干,甲醇溶解后,备用。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中的乙腈/H2O的混合液中乙腈与H2O的体积比为3:2,另加有0.1%(体积比)的三乙胺。

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