高效产氢功能基因载体pET32a‑fdhF及其构建和应用的制作方法

文档序号:12412116阅读:来源:国知局

技术特征:

1.高效产氢功能基因载体pET32a-fdhF,其特征在于,所述基因载体为包含有蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF基因的pET32a质粒。

2.根据权利要求1所述的高效产氢功能基因载体pET32a-fdhF,其特征在于所述蜡状芽孢杆菌为蜡状芽孢杆菌Q1株。

3.构建如权利要求1或2所述的高效产氢功能基因载体pET32a-fdhF的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)设计蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF基因的引物,并扩增蜡状芽孢杆菌甲酸脱氢酶fdhF基因;

(2)回收甲酸脱氢酶fdhF基因的基因片段,进行测序验证扩增基因的完整性;

(3)使用限制性内切酶Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pET32a载体,切胶回收,获得线性化载体;

(4)将准备好的线性化载体和fdhF基因片段连接起来,得到含fdhF基因片段的重组载体;

(5)将重组产物,转化DH5α感受态细菌,得到基因载体pET32a-fdhF。

4.应用如权利要求1或2所述的高效产氢功能基因载体pET32a-fdhF的方法,其特征在于,将基因载体pET32a-fdhF转化到大肠杆菌中,在产氢培养基中培养此大肠杆菌生产氢气。

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