本发明涉及合成化学技术领域，特别是涉及一种橙皮素酯化物及其制备方法和应用。
背景技术：
近年来，肿瘤成为严重危害人类健康的一种多发性疾病，肿瘤是由于机体在各种因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控，使得细胞异常增生而形成的。不合理饮食、遗传因素、环境因素等致癌因素以协同或序贯的方式引起dna损害，从而激活原癌基因和/或灭活肿瘤抑制基因，加上凋亡调节基因和/或dna修复基因的改变，继而引起表达水平的异常，使靶细胞发生转化。被转化的细胞最初多呈克隆性的增生，经过一个漫长的多阶段的演化过程，其中一个克隆相对无限制的扩增，通过附加突变，选择性地形成具有不同特点的亚克隆，即异质化，从而获得浸润和转移的能力，形成恶性肿瘤。因此，治疗肿瘤及研究抗肿瘤药物一直是医药领域研究的重点内容。
然而抗肿瘤药物的作用机理以及药物的作用靶点是多种多样的，且由于肿瘤细胞易产生多药耐药往往导致治疗的失败。寻找有效安全、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是肿瘤药物研发工作者孜孜以求的目标。
技术实现要素：
基于此，有必要提供一种具有抗肿瘤活性的抗肿瘤药物，具体提供了一种具有抗肿瘤活性的橙皮素酯化物及其制备方法和应用。
一种橙皮素酯化物，其结构式如下：
其中，r1为h或c1～c4烷基；r2～r6分别为h、卤素、硝基、烷基和烷氧基中的一种。
上述橙皮素酯化物，以橙皮素为母核结构，通过橙皮素7位的羟基引入苯磺酸基团，不仅保留了橙皮素独特的电子特性和优越的生物活性等特点，使其具有抗肿瘤活性，而且橙皮素和苯磺酸及其衍生物通过共价键连接形成孪药(twindrug)，其在体内代谢生成橙皮素和苯磺酸及其衍生物两种药物，该两种药物产生协同作用，进而增强了其抗肿瘤活性；同时还能在一定程度上提高抗肿瘤活性的选择性，降低药物的不良反应。
在其中一个实施例中，r2～r6中至少一个为卤素、硝基、c1～c4烷基、甲烷氧基和乙烷氧基中的一种。
在其中一个实施例中，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为甲基、硝基或甲烷氧基；或r3、r4及r5同时为h，r2为cl，r6为硝基。
在其中一个实施例中，r1＝h或甲基。
上述橙皮素酯化物的制备方法，包括以下步骤：
在催化剂作用下，将化合物ⅰ和化合物ⅱ于第一有机溶剂中发生磺酸酯化反应，得到橙皮素酯化物；其中化合物ⅰ和化合物ⅱ的结构式如下：
上述橙皮素酯化物的制备方法，原料易得，反应条件温和，步骤少、收率高，适用于工业化生产。得到的橙皮素酯化物不仅具有抗肿瘤活性，而且橙皮素和苯磺酸及其衍生物通过共价键连接形成孪药，其在体内代谢生成橙皮素和苯磺酸及其衍生物两种药物，该两种药物产生协同作用，进而增强了其抗肿瘤活性；同时还能在一定程度上提高抗肿瘤活性的选择性，降低药物的不良反应。
在其中一个实施例中，所述化合物ⅰ和所述化合物ⅱ的物质的量的比为1：1～1.5。
在其中一个实施例中，所述磺酸酯化反应中的催化剂为碱，所述第一有机溶剂选自dmso、乙腈、dmf和丙酮中的至少一种，所述磺酸酯化反应的条件为于60～100℃下反应5～7小时。
在其中一个实施例中，所述化合物ⅰ由化合物ⅲ发生水解反应制得，该步骤具体为：将化合物ⅲ溶于第二有机溶剂得到水解液，调节所述水解液的ph值为5～7，再将调节ph后的溶液于60～100℃下反应2～5小时，过滤得到所述化合物ⅰ；其中化合物ⅲ的结构式如下：
在其中一个实施例中，还包括所述橙皮素酯化物的提纯步骤：将所述橙皮素酯化物用水洗涤，分离并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶，得到提纯后的橙皮素酯化物。
上述橙皮素酯化物在制备具有抗肿瘤作用的药物中的应用。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施方式的橙皮素酯化物，其结构式如下：
其中，r1为h或c1～c4烷基；r2～r6分别为h、卤素、硝基、烷基和烷氧基中的一种。即r2～r6同时为h，或r2～r6中至少一个为卤素、硝基、烷基和烷氧基中的一种。值得一提的是，r2～r6可以相同也可不相同。
橙皮素具有独特的电子特性和优越的生物活性等特点，且橙皮素的来源广、安全无副作用，使其具有抗高血糖、抗癌、抗菌、抗真菌及抗病毒等药学性质，进而具有抗肿瘤活性。橙皮素主要是从橙皮苷水解而来，橙皮苷可从柑橘等水果的果皮和果肉中提取得到。
上述橙皮素酯化物，以橙皮素为母核结构，通过橙皮素7位的羟基引入苯磺酸基团，不仅保留了橙皮素独特的电子特性和优越的生物活性等特点，使其具有抗肿瘤活性，而且橙皮素和苯磺酸及其衍生物通过共价键连接形成孪药(twindrug)，其在体内代谢生成橙皮素和苯磺酸及其衍生物两种药物，该两种药物产生协同作用，进而增强了其抗肿瘤活性；同时还能在一定程度上提高抗肿瘤活性的选择性，降低药物的不良反应。
此外苯磺酸基团的水溶性强，引入苯磺酸基团提高了上述橙皮素酯化物的水溶性。
经初步的体外抗肿瘤活性测试，上述橙皮素酯化物具有较好的肿瘤抑制活性，能用于预防或者治疗细胞异常增殖、形态变化等相关的疾病，尤其是用于治疗或者预防肿瘤生长与转移。且部分化合物的体外活性明显优于已知化合物橙皮素，这为我们寻找更多的以橙皮素为母核的抗肿瘤化合物开辟了新的领域。
优选的，r1＝h或甲基。
优选的，或r2～r6中至少一个为卤素、硝基、c1～c4烷基、甲烷氧基和乙烷氧基中的一种。
更优选的，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为甲基。
更优选的，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为硝基。
更优选的，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为甲烷氧基。
更优选的，r3、r4及r5同时为h，r2为cl，r6为硝基。
较佳实施例的橙皮素酯化物，化合物a～h、化合物j及化合物k，其结构式如下所示。
本发明还提供了上述橙皮素酯化物的制备方法。
一实施方式的橙皮素酯化物的制备方法包括以下步骤：
在催化剂作用下，将化合物ⅰ和化合物ⅱ于有机溶剂中发生磺酸酯化反应，得到橙皮素酯化物；其中r1为h或c1～c4烷基；r2～r6分别为h、卤素、硝基、烷基和烷氧基中的一种。化合物ⅰ和化合物ⅱ的结构式如下：
由于苯磺酸基团的结构较大以及空间位阻的作用，化合物ⅱ优先与化合物ⅰ中的橙皮素母核7位的羟基发生磺酸酯化反应。
上述橙皮素酯化物的制备方法，原料易得，反应条件温和，步骤少、收率高，适用于工业化生产。得到的橙皮素酯化物不仅具有抗肿瘤活性，而且橙皮素和苯磺酸及其衍生物通过共价键连接形成孪药(twindrug)，其在体内代谢生成橙皮素和苯磺酸及其衍生物两种药物，该两种药物产生协同作用，进而增强了其抗肿瘤活性；同时还能在一定程度上提高抗肿瘤活性的选择性，降低药物的不良反应。
其中，化合物ⅰ为橙皮素或其衍生物，化合物ⅱ为苯磺酸或其衍生物。例如，r1为h时，化合物ⅰ为橙皮素。又如，r2～r6同时为h时，化合物ⅱ为苯磺酸。
在其中一个实施例中，所述化合物ⅰ和化合物ⅱ的物质的量的比为1：1～1.5。在该条件下有利于提高产率。优选的，所述化合物ⅰ和化合物ⅱ的物质的量的比为1：1～1.3。更优选的，所述化合物ⅰ和化合物ⅱ的物质的量的比为1：1.3。
在其中一个实施例中，所述磺酸酯化反应中的催化剂为碱，所述磺酸酯化反应中的有机溶剂选自dmso(二甲基亚砜)、乙腈、dmf(二甲基甲酰胺)和丙酮中的至少一种，所述磺酸酯化反应的条件为于60～100℃下反应5～7小时。
优选的，磺酸酯化反应中的有机溶剂为dmf。优选的，所述碱选自碳酸钾、氢氧化钾和碳酸钠中的至少一种。更优选的，所述碱为碳酸钾。优选的，碱与化合物ⅰ的物质的量的比为1：1～4。更优选的，碱与化合物ⅰ的物质的量的比为1：3。
优选的，所述磺酸酯化反应还于脱水剂的作用下反应。更优选的，脱水剂为dcc(二环己基碳二亚胺)。优选的，脱水剂与化合物ⅰ的物质的量的比为1：0.5～1.5。更优选的，脱水剂与化合物ⅰ的物质的量的比为1：1。
在其中一个实施例中，上述橙皮素酯化物的制备方法还包括所述橙皮素酯化物的提纯步骤：将所述橙皮素酯化物用水洗涤，分离并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶，得到提纯后的橙皮素酯化物。
在其中一个实施例中，所述化合物ⅰ由化合物ⅲ发生水解反应制得，其中化合物ⅲ的结构式如下：
其中，r1为h或c1～c4烷基，即化合物ⅲ为橙皮苷或其衍生物，相应的，得到的化合物ⅰ为橙皮素或其衍生物。例如，r1为h时，化合物ⅲ为橙皮苷。
化合物ⅲ发生水解反应制得化合物ⅰ的步骤具体为：将化合物ⅲ溶于有机溶剂得到水解液，调节该水解液的ph值为5～7，再将调节ph后的溶液于60～100℃下反应2～5小时，过滤得到所述化合物ⅰ。
优选的，调节水解液的ph值为5，在该条件下橙皮素或其衍生物能更好的析晶。优选的，在过滤得到化合物ⅰ的步骤之后，还包括化合物ⅰ的烘干步骤。优选的，调节水解液的ph值所用的试剂为盐酸或硫酸。优选的，调节水解液的ph值所用的试剂为浓硫酸。
优选的，所述水解反应中的有机溶剂选自dmso、乙腈、dmf和丙酮中的至少一种。更优选的，所述水解反应中的有机溶剂为dmso。
在其中一个实施例中，当r1为c1～c4烷基时，化合物ⅰ可由橙皮苷发生水解和烷基化反应得到，该步骤具体为将化合物ⅲ溶于有机溶剂得到水解液，调节该水解液的ph值为5～7，再将调节ph后的溶液于60～100℃下反应2～5小时，冷却至室温，向溶液中加入烷基化试剂，在室温下反应，过滤得到所述化合物ⅰ。如此利用橙皮苷一步反应得到橙皮素烷基化衍生物，步骤简单；且在该条件下使得烷基化试剂只能与橙皮素中3-羟基-4-甲氧基苯基的羟基发生烷基化反应。
优选地，烷基化试剂为碘甲烷。优选地，橙皮苷与烷基化试剂的物质的量的比为1：3～5。优选地，加入烷基化试剂后，在室温下反应的时间为6～10小时。
本发明还提供了上述橙皮素酯化物在制备具有抗肿瘤作用的药物中的应用。上述橙皮素酯化物具有较好的肿瘤抑制活性，能用于预防或者治疗细胞异常增殖、形态变化等相关的疾病，尤其是用于治疗或者预防肿瘤生长与转移。且部分化合物的体外活性明显优于已知化合物橙皮素，这为我们寻找更多的以橙皮素为母核的抗肿瘤化合物开辟了新的领域。
以下为具体实施例。
实施例1
实施例1的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4-氧代色满-7-基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物a所示。
实施例1的橙皮素酯化物的主要原料为橙皮苷和苯磺酸。实施例1的橙皮素酯化物的制备方法如下：
将0.16mol橙皮苷置于反应容器中，加入500ml的dmso得到水解液。然后滴入50ml浓硫酸调节水解液的ph值为5，再于100℃下磁力搅拌反应2小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.13mol橙皮素。
将0.13mol橙皮素和0.2mol苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.13moldcc作脱水剂，加入0.42mol碳酸钠于100℃下回流反应6小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得57.27g白色固体，即化合物a。实施例1的收率为80.9％，所有实施例中的收率根据橙皮苷对应的理论产物计算。
实施例1的橙皮素酯化物的质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso)：7.8-7.6(5h,m,j＝7.5hz),6.99(1h,m),6.9-6.7(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(2h,s),3.83(3h,s)，3.4-3.1(2h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso)：196.8,163.8,156.9,149.0,147.3,135.4,132.5,130.4,128.1,119.6,113.4,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0；hrms(esi)for(m+h)+:calcd443.0795,found443.0801。
实施例2～5
实施例2的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4-氧代色满-7-基4-甲基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物b所示。
实施例3的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4-氧代色满-7-基4-硝基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物c所示。
实施例4的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4-氧代色满-7-基2-氯-6-甲基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物d所示。
实施例5的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4-氧代色满-7-基4-甲氧基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物e所示。
实施例2～5的主要原料为橙皮苷和相应的苯磺酸衍生物。如实施例2的主要原料为橙皮苷和4-甲基苯磺酸酯。实施例2～5中橙皮苷发生水解反应得到橙皮素的步骤与实施例1相同；实施例2～5中橙皮素和相应的苯磺酸衍生物发生磺酸酯化反应得到橙皮素酯化物的步骤与实施例1除了原料不同，其他比例均相同：相应的苯磺酸衍生物的加入量均为0.2mol。
实施例2得到55.87g白色固体，即化合物b。实施例2的收率为76.5％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):7.8-7.4(4h,m,j＝7.5hz)，6.99(1h,m),6.9-6.7(2h,m,j＝7.5hz)，6.18(1h,m，j＝7.8hz)，6.14(1h,m,j＝7.8hz)，5.51(1h,s)，5.35(2h,s)，3.83(3h,s)3.4-3.1(2h,s)，2.34(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8，163.8，156.9，149.0，147.3，138.2，132.4，130.8，126.7，119.6，113.8，113.0，102.8，95.1，82.8，56.1，43.0，21.3；hrms(esi)for(m+h)+:calcd457.0952，found457.0957。
实施例3得到62.70g白色固体，即化合物c。实施例3的收率为80.4％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):8.4-8.1(4h,m,j＝7.5hz),6.99(1h,m)，6.9-6.7(2h,m,j＝7.5hz)6.18(1h,m,j＝7.8hz)，6.14(1h,m,j＝7.8hz)，5.51(1h,s),5.35(2h,s)，3.4-3.1(2h,s),3.83(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,163.8,156.9,151.7,149.0,147.3,141.5,130.8,130.1,123.8,119.6,113.8,113.0,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0；hrms(esi)for(m+h)+:calcd488.0646,found488.0651。
实施例4得到64.80g白色固体，即化合物d。实施例4的收率为82.5％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):7.6-7.2(3h,m,j＝7.5hz),6.99(1h,m),6.9-6.7(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(2h,s),3.83(3h,s),3.4-3.1(2h,s),2.64(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,163.8,156.9,149.0,147.3,144.6,138.8,133.8,132.2,130.8,128.2,119.6,113.8,113.0,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0,21.4；hrms(esi)for(m+h)+:calcd491.0562,found491.0567。
实施例5得到63.80g白色固体，即化合物e。实施例5的收率为84.4％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):7.8-7.1(4h,m,j＝7.5hz),6.99(1h,m),6.9-6.7(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(2h,s),3.83(6h,s)，3.4-3.1(2h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,164.4,163.8,156.9,149.0,147.3,132.6,130.8,127.7,119.6,115.6,113.8,113.0,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0；hrms(esi)for(m+h)+:calcd473.0901,found473.0906。
实施例6
实施例6的橙皮素酯化物中r1为h，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为cl。实施例6的橙皮素酯化物的制备方法如下：将0.16mol橙皮苷置于反应容器中，加入300ml的dmso得到水解液。然后滴入浓硫酸调节水解液的ph值为6，再于60℃下磁力搅拌反应5小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.12mol橙皮素。将0.12mol橙皮素和0.12mol4-cl-苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.06moldcc作脱水剂，加入0.48mol碳酸钾于60℃下回流反应7小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得白色固体。
实施例7
实施例7的橙皮素酯化物中r1为h，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为乙氧基。实施例7的橙皮素酯化物的制备方法如下：将0.16mol橙皮苷置于反应容器中，加入500ml的dmso得到水解液。然后滴入浓硫酸调节水解液的ph值为7，再于80℃下磁力搅拌反应3小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.13mol橙皮素。将0.13mol橙皮素和0.20mol4-乙氧基苯磺酸酯充分溶解于400mldmf中，并滴入0.20moldcc作脱水剂，加入0.13mol碳酸钾于80℃下回流反应6小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得白色固体。
实施例8
实施例8的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羟基-4-氧代色满-7-基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物f所示。
实施例8的橙皮素酯化物的主要原料为橙皮苷和苯磺酸。实施例8的橙皮素酯化物的制备方法如下：
将0.16mol橙皮苷置于反应容器中，加入500ml的dmso得到水解液。然后滴入50ml浓硫酸调节水解液的ph值为5，再于100℃下磁力搅拌反应2小时，冷却至室温。向溶液中加入0.70mol碘甲烷，接着在室温下搅拌8小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.128mol橙皮素衍生物。
将0.128mol橙皮素衍生物和0.2mol苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.13moldcc作脱水剂，加入0.42mol碳酸钠于100℃下回流反应6小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得58.94g白色固体，即化合物f。实施例8的收率为80.7％。
实施例8的橙皮素酯化物的质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):7.9-7.6(5h,m,j＝7.5hz),7.03(1h,m),6.81(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(1h,s),3.83(6h,s)3.4-3.1(2h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,163.8,156.9,150.0,148.7,135.4,132.5,130.4,128.1,119.3,112.6,109.4,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0；hrms(esi)for(m+h)+:calcd457.0952,found457.0957。
实施例9～12
实施例9的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羟基-4-氧代色满-7-基4-甲基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物g所示。
实施例10的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羟基-4-氧代色满-7-基4-硝基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物h所示。
实施例11的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羟基-4-氧代色满-7-基2-氯-6-甲基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物j所示。
实施例12的橙皮素酯化物为化合物(s,e)-2-(3,4-二甲氧基苯基)-5-羟基-4-氧代色满-7-基4-甲氧基苯磺酸酯，其结构式如上述化合物k所示。
实施例9～12的主要原料为橙皮苷和相应的苯磺酸衍生物。实施例9～12中橙皮苷发生水解和甲基化反应得到橙皮素衍生物的步骤与实施例8相同；实施例9～12中橙皮素衍生物和相应的苯磺酸衍生物发生磺酸酯化反应得到橙皮素酯化物的步骤与实施例8除了原料不同，其他比例均相同：相应的苯磺酸衍生物的加入量均为0.2mol。
实施例9得到60.00g白色固体，即化合物g。实施例9的收率为79.7％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso)：7.8-7.4(4h,m,j＝7.5hz),7.03(1h,m),6.81(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz)，6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(1h,s),3.83(6h,s),3.4-3.1(2h,s),2.34(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso)：196.8,163.8,156.9,150.0,148.7,138.2,132.4,130.4,126.7,119.3,112.6,109.4,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0,21.3；hrms(esi)for(m+h)+:calcd471.1108,found471.1114。
实施例10得到67.08g白色固体，即化合物h。实施例10的收率为83.6％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):8.4-8.1(4h,m,j＝7.5hz),7.03(1h,m),6.81(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(1h,s),3.83(6h,s),3.4-3.1(2h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,163.8,156.9,151.7,150.0,148.7,141.5,130.4,123.8,119.3,112.6,109.4,102.8,95.1,82.8,56.1,51.7,43.0；hrms(esi)for(m+h)+:calcd502.0802,found502.0808。
实施例11得到65.60g白色固体，即化合物i。实施例11的收率为81.2％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso)：7.6-7.2(3h,m,j＝7.5hz),7.03(1h,m),6.81(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(1h,s),3.83(6h,s),3.4-3.1(2h,s),2.64(3h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso)：196.8,163.8,156.9,150.0,148.7,144.6,138.8,133.8,132.2,130.6,128.2,119.3,112.6,109.4,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0,21.4；hrms(esi)for(m+h)+:calcd505.0718,found505.0724。
实施例12得到66.24g白色固体，即化合物j。实施例12的收率为85.1％。其质谱结果如下：1h-nmr(300mhz,dmso):7.8-7.1(4h,m,j＝7.5hz),7.03(1h,m),6.81(2h,m,j＝7.5hz),6.18(1h,m,j＝7.8hz),6.14(1h,m,j＝7.8hz),5.51(1h,s),5.35(1h,s),3.83(9h,s),3.4-3.1(2h,s)；13c-nmr(75mhz,dmso):196.8,164.4,163.8,156.9,150.0,148.7,132.6,130.4,127.7,119.3,115.6,112.6,109.4,102.8,95.1,82.8,56.1,43.0,21.4；hrms(esi)for(m+h)+:calcd487.1057,found487.1063。
实施例13
实施例13的橙皮素酯化物中r1为ch3，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为cl。实施例13的橙皮素酯化物的制备方法如下：将0.16mol橙皮苷置于反应容器中，加入300ml的dmso得到水解液。然后滴入浓硫酸调节水解液的ph值为6，再于60℃下磁力搅拌反应5小时，冷却至室温。向溶液中加入0.48mol碘甲烷，接着在室温下搅拌10小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.128mol橙皮素衍生物。将0.128mol橙皮素衍生物和0.12mol4-cl-苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.06moldcc作脱水剂，加入0.48mol碳酸钾于60℃下回流反应7小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得白色固体。
实施例14
实施例14的橙皮素酯化物中r1为c2h5，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为乙氧基。实施例14的橙皮素酯化物的制备方法如下：将100g(0.16mol)橙皮苷置于反应容器中，加入300ml的dmso得到水解液。然后滴入浓硫酸调节水解液的ph值为6，再于60℃下磁力搅拌反应5小时，冷却至室温。向溶液中加入0.80mol碘乙烷，接着在室温下搅拌6小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.128mol橙皮素衍生物。将0.128mol橙皮素衍生物和0.12mol4-cl-苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.06moldcc作脱水剂，加入0.48mol碳酸钾于60℃下回流反应7小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得白色固体。
实施例15
实施例15的橙皮素酯化物中r1为ch3，r2、r3、r5及r6同时为h，r4为乙氧基。实施例15的橙皮素酯化物的制备方法如下：将0.16mol橙皮苷衍生物(化合物ⅲ，r1为ch3)置于反应容器中，加入300ml的dmso得到水解液。然后滴入浓硫酸调节水解液的ph值为6，再于60℃下磁力搅拌反应5小时，静置过滤得到沉淀物，烘干得到0.128mol橙皮素衍生物。将0.128mol橙皮素衍生物和0.12mol4-cl-苯磺酸充分溶解于400mldmf中，并滴入0.06moldcc作脱水剂，加入0.48mol碳酸钾于60℃下回流反应7小时，得到的溶液冷却至室温，用水洗涤，静置分离有机层，并浓缩有机层，再采用甲醇重结晶得白色固体。
将实施例1～5及实施例8～12得到的橙皮素酯化物分别进行抗肿瘤活性试验。具体试验为肿瘤细胞增殖抑制试验，试验方法采用常规的mtt法(参考吕秋军主编《新药药理学研究方法》，2007：242-243)。细胞株选用：非小细胞肺癌细胞(a549)，人肝癌细胞(smmc-7721)，人胶质瘤细胞(u251)，人胃腺癌细胞(sgc-7901)，人乳腺癌细胞(mcf-7)。培养液为dmem+15％nbs+双抗。
样品液的配制：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成的100ìmol/l的溶液或者均匀的混悬液，然后用dmso的pbs(-)稀释，最终浓度分别为0.1、1、10、20、40、60、80100ìmol/l。将上市的抗肿瘤药物阿糖胞苷(ara-c)以同样的条件配成对照品溶液。
细胞培养：贴壁生长肿瘤细胞培养于含10％灭活新生牛血清和青霉素、链霉素(各100万u/l)的1640培养液中，置于37℃，5％co2，饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养。细胞贴壁生长，每2～3天传代1次，传代时首先倒出培养液，pbs洗2次，胰酶消化后，加入新鲜的培养液吹打均匀，调整细胞至适当浓度移入新的培养瓶中，添加培养液至适量。取对数生长期细胞用于实验。
mtt法检测细胞活性及ic50的测定。
实验原理：活细胞线粒体中脱氢酶能将黄色的mtt还原成不溶于水的蓝紫色产物甲臜(mttformazan)，并沉积在细胞中，生成的量与活细胞数目成正比，而死细胞没有这种功能。dmso能溶解蓝紫色结晶物，颜色深浅与所含的量成正比，因此用酶标仪测定的光吸收值可反映细胞存活率。
实验方法：取对数生长期细胞，消化、计数，以2×104/ml的密度接种于96孔培养板中，每孔100ìl。培养24小时后，将待测化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100ìmol/l浓度处理细胞。实验组每个浓度设5个复孔，以含0.4％dmso的培养液作对照。药物作用48小时后，弃上清，每孔加入100ìl的mtt(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2h-四唑氢溴酸盐)(1mg/ml)，继续培养4小时，弃上清，每孔加入100ìl的dmso，振荡混匀，用酶标仪在570nm处测定吸光度值，采用ic50计算软件求出半数抑制浓度(ic50)。得到实施例的化合物及对照组的抗肿瘤药物阿糖胞苷(ara-c)对不同肿瘤细胞的半数抑制浓度ic50的结果见表1(单位：ìmol/l)。
表1
以上实验结果表明，本发明的橙皮素酯化物均具有良好的抗肿瘤活性。且其中化合物a、b、c、d、f、g、h、j在体外抗肿瘤活性突出，优于或接近抗肿瘤药物阿糖胞苷(ara-c)，此外也发现不同橙皮素酯化物对不同肿瘤细胞的活性不同。因此本发明橙皮素酯化物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物或者其混合物作为活性成份的药物组合物可以用于制备抗肿瘤药物。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。