本发明涉及生物
技术领域：
，特别涉及一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法。
背景技术：
：蚕豆是豆科巢菜属一年生或越年生草本，是粮食、蔬菜、饲料和绿肥兼用型作物。我国蚕豆蛋白饲料占蚕豆产量的50％以上，是主要的蛋白饲料原料。蚕豆种皮较厚，种皮中含有缩合类单宁。单宁是饲料中的抗营养因子之一，单宁与动物的肠壁蛋白质结合，促使蛋白质沉淀。影响中肠的渗透性和对蛋白质、氨基酸等重要营养物质的吸收、消化和利用；抑制动物肠消化酶的活性；降低血淋巴中糖及蛋白质含量等。单宁可与唾液蛋白结合，引起收敛感和干燥感并产生涩味。单宁又可与淀粉等结合，影响动物对淀粉等营养物质的取食和消化，降低食物的营养价值。抗营养因子的存在，从而增加了饲料的消耗量，增加了生产成本。因此，加快无单宁种质资源的利用和新品种的选育，成为蚕豆遗传育种工作中的重要研究内容之一。目前，降低蚕豆单宁的方法主要有物理方法和生物技术方法。物理方法包括加热法、膨化法、机械加工法、水浸泡法；生物技术方法包括酶制剂法、发酵法、育种法。上述方法中，育种方法可以从根本上除去抗营养因子单宁。常规育种是通过性状的表现型间接对基因型进行选择，这种选择方法虽然可行，但是由于目的基因位点有纯合和杂合之分，需要多年自交鉴别，故育种年限较长。近年来，随着分子标记技术的发展，分子标记辅助育种和分子设计育种等现代育种技术应运而生，使人们能够直接对基因型进行选择，选择结果更加客观、准确，大大提高育种的效率和缩短育种的年限。因此，利用分子标记技术对选择性状进行分子标记，是分子标记辅助育种和分子设计育种等工作的基础，同时主要农艺性状分子标记的获得，对于控制该性状基因的研究也具有十分重要的理论和实际意义。ssr(simplesequencerepeat)标记是一种操作简便的分子标记，属于显性标记，在基因组中分布平均、多态性高、结果准确，在许多农作物的遗传多样性研究、分子标记、基因定位和分子标记辅助育种等方面广泛应用。因此，发明一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法来解决上述问题很有必要。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法，以解决上述
背景技术：
中提出的问题。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法，包括如下步骤：以待测蚕豆的基因组dna为模板，用est786引物对进行pcr扩增；如果所述pcr扩增在800-1000bp区间有产物，待测蚕豆为候选的具有无单宁性状的蚕豆；如果所述pcr扩增在1000-1200bp区间内有产物，待测蚕豆为候选的不具有无单宁性状的蚕豆；所述est786引物由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成；所述est786引物在辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状中的应用：所述satt408引物对由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成；所述est786引物在制备辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的试剂盒中的应用：所述est786引物由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成。优选的，所述试剂盒中est-ssr引物对的退火温度为50℃。优选的，est-786引物对于具有蚕豆种皮无单宁性状的大豆的特异性靶序列为800bp-1000bp。本发明的技术效果和优点：本发明通过利用分子标记鉴定植株幼苗中是否存在无单宁基因，同时可鉴定出控制无单宁蚕豆的基因型，进而推断植株将产生何种单宁的蚕豆，其后代是否会发生单宁性状的分离，对育种具有重大价值，可应用于无单宁品种的分子标记辅助育种和分子设计育种，能够大大减少田间选择的工作量，缩短育种年限，同时由于所获得的无单宁的分子标记est786-800bp标记与蚕豆无单宁基因之间的遗传距离只有2.9cm，可利用该标记对无单宁基因进行进一步深入研究。本发明工艺简单，设备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用。具体实施方式下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法，包括如下步骤：以待测蚕豆的基因组dna为模板，用est786引物对进行pcr扩增；如果所述pcr扩增在900bp区间有产物，待测蚕豆为候选的具有无单宁性状的蚕豆；如果所述pcr扩增在1100bp区间内有产物，待测蚕豆为候选的不具有无单宁性状的蚕豆；所述est786引物对由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成；所述est786引物对在制备辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的试剂盒中的应用：所述est786引物对由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成。所述试剂盒包括est786引物对和一组est-ssr引物对，所述est-ssr引物对由序列表的序列3所示的单链dna分子和序列表的序列4所示的单链dna分子组成。所述试剂盒中est-ssr引物对的退火温度为50℃。所述试剂盒中est-ssr引物对于具有蚕豆种皮无单宁性状的蚕豆的特异性靶序列为800bp-1000bp。实施例2一种辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状的方法，包括如下步骤：以待测蚕豆的基因组dna为模板，用est786引物对进行pcr扩增；如果所述pcr扩增在1000bp区间有产物，待测蚕豆为候选的具有无单宁性状的蚕豆；如果所述pcr扩增在1200bp区间内有产物，待测蚕豆为候选的不具有无单宁性状的蚕豆；所述est786引物对由序列表的序列1所示的单链dna分子和序列表的序列2所示的单链dna分子组成；所述est786引物对在辅助鉴定蚕豆种皮无单宁性状中的应用：所述试剂盒中est-ssr引物对的退火温度为50℃，所述试剂盒中est-ssr引物对于具有蚕豆种皮无单宁性状的蚕豆的特异性靶序列为900bp。本发明通过利用分子标记鉴定植株幼苗中是否存在无单宁基因，同时可鉴定出控制无单宁蚕豆的基因型，进而推断植株将产生何种单宁的蚕豆，其后代是否会发生单宁性状的分离，对育种具有重大价值，可应用于无单宁品种的分子标记辅助育种和分子设计育种，能够大大减少田间选择的工作量，缩短育种年限，同时由于所获得的无单宁的分子标记est786-900bp标记与蚕豆无单宁基因之间的遗传距离只有2.9cm，可利用该标记对无单宁基因进行进一步深入研究。本发明工艺简单，设备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用。est786引物对的上游引物和下游引物如下：上引物对(序列表的序列1)：gcggtccgtgctgttaattctata；下游引物(序列表的序列2)：gcgtgatttattcatgatatatttttg。表1为辅助鉴定的蚕豆品种。序号品种名称产量1青海11号亩产350千克左右2青海12号亩产360千克左右3青蚕14号亩产400千克左右4湟源马牙亩产300千克左右53290亩产260千克左右6临蚕6号亩产350千克左右表2为鉴定品种蚕豆的产物结果。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12