避免藻类中的外源核酸的表观遗传沉默的制作方法

文档序号:25541920发布日期:2021-06-18 20:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种突变体光合生物,其包含编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因,其中与不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体光合微生物具有降低的chgdna甲基化。

2.根据权利要求1所述的突变体光合生物,其中所述突变体是基因工程化突变体。

3.根据权利要求2所述的突变体光合生物,其中所述突变体已通过插入诱变、基因置换、rnai、反义rna、大范围核酸酶基因组工程化、一种或多种核酶和/或crispr/cas系统进行基因工程化。

4.根据权利要求3所述的突变体光合生物,其中所述突变体已通过crispr/cas系统进行基因工程化。

5.根据权利要求1所述的突变体光合生物,其中所述突变体已通过uv辐照、γ辐照或化学诱变生成。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的突变体光合生物,其中所述突变或减弱是在编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因中,所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1、3、5、7或28的氨基酸序列具有至少80%一致性的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的突变体光合生物,其中具有chgdna甲基转移酶活性的所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1或seqidno:28的氨基酸序列具有至少80%一致性的氨基酸序列。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的突变体光合生物,其中所述突变体光合生物包含外源dna,并且其中所述降低的chgdna甲基化是在所述外源dna中。

9.根据权利要求8所述的突变体光合生物,其中所述外源dna整合到所述光合生物的所述基因组中。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的突变体光合生物,其中所述降低的chgdna甲基化是在所述光合生物的天然dna中。

11.根据权利要求10所述的突变体光合生物,其中所述其中所述降低的chgdna甲基化是在所述突变体光合生物的着丝粒或高度重复dna区域中。

12.根据权利要求8至9中任一项所述的突变体光合生物,其中与包含所述外源核酸但不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述外源核酸的表达得到改进。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的突变体光合生物,其中所述突变体光合生物具有降低的组蛋白h3的赖氨酸9(h3k9)的单甲基化或三甲基化。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的突变体光合生物,其中与不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体光合生物具有降低的chhdna甲基化。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的突变体光合生物,其中所述光合生物是藻类。

16.一种增强光合生物中的外源dna的表达的方法,其包含:

a)将外源dna引入到所述光合生物中;

b)使编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因突变或减弱,其中与包含所述外源dna但不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体微生物具有降低的所述外源dna的chgdna甲基化;其中与所述对照光合生物相比,所述外源dna的表达在所述光合生物中增强。

17.根据权利要求16所述的方法,其中所述编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因的突变或减弱是通过基因工程化实现的。

18.根据权利要求17所述的方法,其中所述基因工程化是通过插入诱变、基因置换、rnai、反义rna、大范围核酸酶基因组工程化、一种或多种核酶和/或crispr/cas系统进行。

19.根据权利要求18所述的方法,其中所述基因工程化是通过crispr/cas系统进行。

20.根据权利要求16所述的方法,其中所述编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因的突变或减弱是通过uv辐照、γ辐照或化学诱变实现的。

21.根据权利要求16至20中任一项所述的方法,其中所述突变或减弱是在编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因中,所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1或seqidno:28的氨基酸序列具有至少65%一致性的氨基酸序列。

22.根据权利要求21所述的方法,其中具有chgdna甲基转移酶活性的所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1或seqidno:28的氨基酸序列具有至少80%一致性的氨基酸序列。

23.根据权利要求16至22中任一项所述的方法,其中与不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体光合生物具有降低的chhdna甲基化。

24.根据权利要求16至23中任一项所述的方法,其中所述外源dna整合到所述光合生物的所述基因组中。

25.根据权利要求16至24中任一项所述的方法,其中所述光合生物是藻类。

26.一种降低光合生物中的组蛋白h3上的赖氨酸9(h3k9)的单甲基化或三甲基化的方法,其包含:

使编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因突变或减弱,其中与不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体微生物具有降低的chgdna甲基化;其中所述光合生物体的组蛋白h3上的赖氨酸9(h3k9)的单甲基化或三甲基化降低。

27.根据权利要求26所述的方法,其中所述编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因的突变或减弱是通过基因工程化实现的。

28.根据权利要求27所述的方法,其中所述基因工程化是通过插入诱变、基因置换、rnai、反义rna、大范围核酸酶基因组工程化、一种或多种核酶和/或crispr/cas系统进行。

29.根据权利要求28所述的方法,其中所述基因工程化是通过crispr/cas系统进行。

30.根据权利要求26所述的方法,其中所述编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因的突变或减弱是通过uv辐照、γ辐照或化学诱变实现的。

31.根据权利要求26至30中任一项所述的方法,其中所述突变或减弱是在编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的基因中,所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1或seqidno:28的氨基酸序列具有至少65%一致性的氨基酸序列。

32.根据权利要求31所述的方法,其中具有chgdna甲基转移酶活性的所述多肽包含在所述基因的所述突变或减弱之前与seqidno:1或seqidno:28的氨基酸序列具有至少80%一致性的氨基酸序列。

33.根据权利要求26至32中任一项所述的方法,其中与不具有编码具有chgdna甲基转移酶活性的多肽的突变或减弱基因的对照光合生物相比,所述突变体光合生物具有降低的chhdna甲基化。

34.根据权利要求26至33中任一项所述的方法,其中所述光合生物是藻类。

35.根据权利要求26至34中任一项所述的方法,其中所述光合生物包含外源dna。

36.根据权利要求35所述的方法,其中所述外源dna整合到所述光合生物的所述基因组中。

37.根据权利要求36所述的方法,其中所述光合生物的组蛋白h3上的赖氨酸9(h3k9)的单甲基化或三甲基化的所述减少是在包含所述外源dna的染色体的一部分中。


技术总结
本申请涉及识别包括藻类物种中的包括CHG甲基化的新颖DNA甲基转移酶。本申请涉及藻类突变体,其允许通过缓解外源DNA的CHG和CHH甲基化以及组蛋白3的赖氨酸9(H3K9)的单甲基化和三甲基化的表观遗传机制来表达外源基因。这通过使藻类中的甲基转移酶(MTase)基因突变或减弱来实现。本申请还涉及在藻类物种中有效地表达外源基因的方法。

技术研发人员:J·E·佩斯;R·斯普雷菲科
受保护的技术使用者:合成基因组股份有限公司
技术研发日:2019.12.12
技术公布日:2021.06.18
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