本发明涉及杀菌剂技术领域，尤其是涉及一种香草醛异噁唑类化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
植物病原菌与大多数植物病害密切相关，植物病原菌能够导致植物发生各种病害，直接影响到植物产量与产品的品质，对农业生产和国民经济产生较大的影响。目前对于植物病害的防治措施，主要通过化学杀菌剂。但由于长时间用药或单一药剂频繁使用，会导致植物病原菌对杀菌剂的抗药性不断增强。并且，由于用药导致的在农产品或环境中的残留问题也越来越成为人们关注的焦点。
因而，开发具有高效、低毒、生物安全、环境友好的先导化合物具有重要意义。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供香草醛异噁唑类化合物，具有优异杀真菌活性，且低毒、生物安全、环境友好。
本发明的第二目的在于提供香草醛异噁唑类化合物的制备方法。
本发明的第三目的在于提供香草醛异噁唑类化合物在制备杀菌农药中的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
香草醛异噁唑类化合物，具有如式a所示的结构通式：
其中，r1选自h、乙酰基、炔丙基和苄基中的任一种；r2选自取代或未取代的芳香基团中的任一种。
本发明在香草醛结构中引入异噁唑结构，设计合成一系列香草醛异噁唑类化合物，研究生物活性，考察构效关系，得到具有优异杀菌活性的化合物，为筛选更好的杀菌剂奠定基础，有利于提高新农药创制的速度和效率，降低农药开发成本，提高发现高效、低毒、生物安全、环境友好的新型农药的成功率。
在本发明的具体实施方式中，所述芳香基团为苯基或萘基。
在本发明的具体实施方式中，r2为苯基；或者r2为
在本发明的具体实施方式中，r3选自f、cl、甲氧基、甲基、乙基和正丙基中的至少一种。
在本发明的具体实施方式中，r2为
在本发明的具体实施方式中，r1为乙酰基或h，r2为苯基、对氟取代苯基、对氯取代苯基、对甲基取代苯基、对甲氧基取代苯基或对乙基取代苯基。
本发明还提供了香草醛异噁唑类化合物的制备方法，包括如下步骤：
当r1为h时，香草醛肟与化合物b于溶剂中，在催化剂和氧化剂的作用下反应，得到化合物ⅳ；其中，化合物b与化合物ⅳ的结构式分别如下：
当r1为乙酰基时，化合物ⅳ与乙酰化试剂在有机碱的作用下反应，得到化合物ⅴ；其中，化合物ⅴ的结构式如下：
当r1为炔丙基时，化合物ⅳ与炔丙基化试剂在氢化钠的作用下反应，得到化合物ⅵ；其中，化合物ⅵ的结构式如下：
当r1为苄基时，化合物ⅳ与苄基化试剂在氢化钠的作用下反应，得到化合物ⅶ；其中，化合物ⅶ的结构式如下：
在本发明的具体实施方式中，所述催化剂为氯化钾，所述氧化剂为过硫酸氢钾复合盐。进一步的，所述溶剂为水，优选为去离子水。
在本发明的具体实施方式中，当r1为h时，于常温下反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟与所述化合物b的摩尔比为1﹕(1～1.5)，优选为1﹕(1.2～1.3)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物b包括苯乙炔、对氯苯乙炔、对氟苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对甲基苯乙炔、对乙基苯乙炔和对丙基苯乙炔中的任一种。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ的后处理包括：采用乙酸乙酯对反应后的物料进行萃取分液，直至检测水相中无产物剩余后，收集有机相，干燥处理，然后除去乙酸乙酯，进行柱层析分离纯化。
在本发明的具体实施方式中，所述有机碱为吡啶，所述乙酰化试剂为乙酸酐。
在本发明的具体实施方式中，当r1为乙酰基时，于常温下反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述乙酰化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(1.5～2)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅴ的后处理包括：将反应后的物料浓缩，采用乙酸乙酯萃取所述浓缩后的物料，然后采用去离子水洗涤，合并收集有机相，干燥后除溶，再进行柱层析分离纯化。
在本发明的具体实施方式中，所述炔丙基化试剂为3-溴丙炔。
在本发明的具体实施方式中，当r1为炔丙基时，于常温下反应8～16h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述炔丙基化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(1.5～2)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅵ的后处理包括：向反应后的物料中加入大量去离子水淬灭反应，然后旋干，再采用乙酸乙酯和去离子水萃取，收集有机相，干燥后除溶，再进行柱层析分离纯化。
在本发明的具体实施方式中，所述苄基化试剂为溴化苄。
在本发明的具体实施方式中，当r1为苄基时，于常温下反应8～16h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述苄基化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(2～2.5)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅶ的后处理包括：向反应后的物料中加入大量去离子水淬灭反应，然后旋干，再采用乙酸乙酯和去离子水萃取，收集有机相，干燥后除溶，再进行重结晶。
上述各步骤的反应时间可通过tlc监测反应程度，对反应时间进行适应性调整。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟的制备包括：香草醛与盐酸羟胺于醇类溶剂中，在缚酸剂的作用下，常温搅拌反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟的后处理包括：固液分离收集液体，将所述液体浓缩。
本发明还提供了上述任意一种所述的香草醛异噁唑类化合物在制备杀菌农药中的应用。
在本发明的具体实施方式中，所述杀菌农药为抑制植物病原菌真菌的杀菌农药。
在本发明的具体实施方式中，所述植物病原菌真菌包括烟草灰霉病、层出镰刀菌、木贼镰刀菌、玉米圆斑病、胶胞炭疽菌和草茎点霉中的至少一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明在香草醛结构中引入异噁唑结构，设计合成一系列香草醛异噁唑类化合物，研究生物活性，考察构效关系，得到具有优异杀菌活性的化合物；
(2)本发明的香草醛异噁唑类化合物对烟草灰霉病、层出镰刀菌、木贼镰刀菌、玉米圆斑病、胶胞炭疽菌和草茎点霉等植物病原真菌菌丝生长均具有一定抑制作用，且安全易降解，为筛选更好的杀菌剂奠定基础，有利于提高新农药创制的速度和效率，降低农药开发成本，提高发现高效、低毒、生物安全、环境友好的新型农药的成功率。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
香草醛异噁唑类化合物，具有如式a所示的结构通式：
其中，r1选自h、乙酰基、炔丙基和苄基中的任一种；r2选自取代或未取代的芳香基团中的任一种。
本发明在香草醛结构中引入异噁唑结构，设计合成一系列香草醛异噁唑类化合物，研究生物活性，考察构效关系，得到具有优异杀菌活性的化合物。
在本发明的具体实施方式中，所述芳香基团为苯基或萘基。
在本发明的具体实施方式中，r2为苯基；或者r2为
在本发明的具体实施方式中，r3选自f、cl、甲氧基、甲基、乙基和正丙基中的至少一种。
在本发明的具体实施方式中，r2为
本发明中所涉及的波浪线表示r2中与化合物其余部分的连接位置。
在本发明的具体实施方式中，r1为乙酰基或h，r2为苯基、对氟取代苯基、对氯取代苯基、对甲基取代苯基、对甲氧基取代苯基或对乙基取代苯基。
如在不同实施方式中，香草醛异噁唑类化合物的结构式可分别如下：
本发明还提供了香草醛异噁唑类化合物的制备方法，包括如下步骤：
当r1为h时，香草醛肟与化合物b于溶剂中，在催化剂和氧化剂的作用下反应，得到化合物ⅳ；
当r1为乙酰基时，化合物ⅳ与乙酰化试剂在有机碱的作用下反应，得到化合物ⅴ；
当r1为炔丙基时，化合物ⅳ与炔丙基化试剂在氢化钠的作用下反应，得到化合物ⅵ；
当r1为苄基时，化合物ⅳ与苄基化试剂在氢化钠的作用下反应，得到化合物ⅶ；
其中，化合物b、化合物ⅳ、化合物ⅴ、化合物ⅵ、化合物ⅶ的结构式分别如下：
上述步骤合成路线如下：
在本发明的具体实施方式中，所述催化剂为氯化钾，所述氧化剂为过硫酸氢钾复合盐。进一步的，所述溶剂为水，优选为去离子水。
在本发明的具体实施方式中，当r1为h时，于常温下反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟与所述化合物b的摩尔比为1﹕(1～1.5)，优选为1﹕(1.2～1.3)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物b包括苯乙炔、对氯苯乙炔、对氟苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对甲基苯乙炔、对乙基苯乙炔和对丙基苯乙炔中的任一种。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ的后处理包括：采用乙酸乙酯对反应后的物料进行萃取分液，直至检测水相中无产物剩余后，收集有机相，干燥处理然后除去乙酸乙酯，再进行柱层析分离纯化。
在实际操作中，所述化合物ⅳ的制备包括：取香草醛肟，加入去离子水作反应溶剂，再加入催化剂、氧化剂以及化合物b，室温搅拌反应。通过tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝3﹕1]监测反应进行程度，当反应完成后，停止反应，进行后处理。
在本发明的具体实施方式中，所述有机碱为吡啶，所述乙酰化试剂为乙酸酐。
在本发明的具体实施方式中，当r1为乙酰基时，于常温下反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述乙酰化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(1.5～2)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅴ的后处理包括：将反应后的物料浓缩，采用乙酸乙酯萃取所述浓缩后的物料，然后采用去离子水洗涤，合并收集有机相，干燥后除溶，再进行柱层析分离纯化。
在实际操作中，所述化合物ⅴ的制备包括：取化合物ⅳ，加入干燥吡啶充分溶解原料，冰水浴中向反应体系中缓慢滴加乙酰化试剂，然后于常温搅拌反应。通过tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝2.5﹕1]监测反应进行程度，当反应完成后，停止反应，进行后处理。
在本发明的具体实施方式中，所述炔丙基化试剂为3-溴丙炔。
在本发明的具体实施方式中，当r1为炔丙基时，于常温下反应8～16h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述炔丙基化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(1.5～2)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅵ的后处理包括：向反应后的物料中加入大量去离子水淬灭反应，然后旋干，再采用乙酸乙酯和去离子水萃取，收集有机相，干燥后除溶，再进行柱层析分离纯化。
在实际操作中，所述化合物ⅵ的制备包括：取化合物ⅳ，采用无水dmf作为反应溶剂，将反应容器固定于低温冷却液循环泵中，设定温度低于0℃，如-30℃，然后加入氢化钠，低温搅拌5min，确证溶液不产生气体后缓慢滴加炔丙基化试剂，然后将反应体系移至室温下反应。通过tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝2.5﹕1]监测反应进行程度，当反应完成后，停止反应，进行后处理。
在本发明的具体实施方式中，所述苄基化试剂为溴化苄。
在本发明的具体实施方式中，当r1为苄基时，于常温下反应8～16h。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅳ与所述苄基化试剂的摩尔比为1﹕(1～3)，优选为1﹕(2～2.5)。
在本发明的具体实施方式中，所述化合物ⅶ的后处理包括：向反应后的物料中加入大量去离子水淬灭反应，然后旋干，再采用乙酸乙酯和去离子水萃取，收集有机相，干燥后除溶，再进行重结晶处理。
在实际操作中，所述化合物ⅶ的制备包括：取化合物ⅳ，采用无水dmf作为反应溶剂，将反应容器固定于低温冷却液循环泵中，设定温度低于0℃，如-30℃，然后加入氢化钠，低温搅拌5min，确证溶液不产生气体后缓慢滴加苄基化试剂，然后将反应体系移至室温下反应。通过tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝4﹕1]监测反应进行程度，当反应完成后，停止反应，进行后处理。
上述各步骤的反应时间可通过tlc监测反应程度，对反应时间进行适应性调整。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟的制备包括：香草醛与盐酸羟胺于醇类溶剂中，在缚酸剂的作用下，常温搅拌反应12～24h。
在本发明的具体实施方式中，所述醇类溶剂为甲醇；所述缚酸剂为无机碱，如碳酸钾等。
在本发明的具体实施方式中，所述香草醛肟的后处理包括：固液分离收集液体，将所述液体浓缩。
本发明还提供了上述任意一种所述的香草醛异噁唑类化合物在制备杀菌农药中的应用。
在本发明的具体实施方式中，所述杀菌农药为抑制植物病原菌真菌的杀菌农药。
在本发明的具体实施方式中，所述植物病原菌真菌包括烟草灰霉病、层出镰刀菌、木贼镰刀菌、玉米圆斑病、胶胞炭疽菌和草茎点霉中的至少一种。
实施例1
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ2及其制备方法，化合物ⅳ2的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
步骤(i)：称取30g香草醛于1000ml圆底烧瓶中，加入无水甲醇溶解，然后加入16.44g盐酸羟胺、32.76g无水碳酸钾，室温搅拌16h，tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝2﹕1]检测反应完全。停止反应后，将反应后物料抽滤，收集滤液，然后将滤液减压浓缩，得到香草醛肟纯品。
步骤(ii)：取4g香草醛肟于250ml圆底烧瓶中，加入50ml去离子水作反应溶剂，然后加入9.15g过硫酸氢钾复合盐(oxone，2khso5·khso4·k2so4)、1.78g氯化钾和3.24ml苯乙炔，室温搅拌18h，tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝3﹕1]监测直至反应完全，停止反应。停止反应后，向反应后物料中加乙酸乙酯300ml萃取2次，分液，tlc检测水相中无产物剩余后，收集有机相，并用无水硫酸钠干燥有机相，然后旋干乙酸乙酯，柱层析分离得香草醛异噁唑类化合物ⅳ2，产率60％。
实施例2
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ1及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对甲氧基苯乙炔。
实施例3
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ3及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对氯苯乙炔。
实施例4
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ4及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对氟苯乙炔。
实施例5
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ5及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对甲基苯乙炔。
实施例6
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ6及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对乙基苯乙炔。
实施例7
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅳ7及其制备方法，参考实施例1的合成路线，区别仅在于：将步骤(ii)中的苯乙炔替换为等摩尔的对丙基苯乙炔。
实施例8
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ2及其制备方法，化合物ⅴ2的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
参考实施例1的合成路线合成化合物ⅳ2；
步骤(iii)：称取0.4g化合物ⅳ2加入50ml圆底烧瓶中，加压泵入10ml干燥吡啶充分溶解原料，冰水浴中向反应体系缓慢滴加0.25ml乙酸酐，常温搅拌反应18h，tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝2.5﹕1]监测直至反应完全，停止反应。然后将反应后的物料减压浓缩，将浓缩产物用乙酸乙酯萃取(2次，每次50ml)，去离子水洗(1次，25ml)，合并有机相后加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干滤液，柱层析纯化得化合物ⅴ2，产率84％。
实施例9
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ1及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ1。
实施例10
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ3及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ3。
实施例11
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ4及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ4。
实施例12
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ5及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ5。
实施例13
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ6及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ6。
实施例14
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅴ7及其制备方法，参考实施例8的合成路线，区别仅在于：将步骤(iii)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ7。
实施例15
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ2及其制备方法，化合物ⅵ2的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
参考实施例1的合成路线合成化合物ⅳ2；
步骤(iv)：称取0.5g化合物ⅳ2加入50ml圆底烧瓶中，加压泵入10ml无水dmf作为反应溶剂。将圆底烧瓶固定于低温冷却液循环泵中，设定温度-30℃，加入0.15g氢化钠，低温搅拌5min，确证溶液不产生气体后缓慢滴加0.25ml的3-溴丙炔，然后将反应体系移至室温下反应12h，tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝2.5﹕1]监测直至反应完全，停止反应。将反应后物料转移至2000ml圆底烧瓶中，加入大量去离子水淬灭反应，然后于70℃旋干，加乙酸乙酯(2次，每次100ml)、去离子水(2次，每次40ml)萃取，合并有机相后加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干滤液，柱层析分离得化合物ⅵ2。
实施例16
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ1及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ1。
实施例17
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ3及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ3。
实施例18
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ4及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ4。
实施例19
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ5及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ5。
实施例20
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ6及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ6。
实施例21
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅵ7及其制备方法，参考实施例15的合成路线，区别仅在于：将步骤(iv)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ7。
实施例22
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ2及其制备方法，化合物ⅶ2的合成路线如下：
具体合成步骤如下：
参考实施例1的合成路线合成化合物ⅳ2；
步骤(v)：称取0.5g化合物ⅳ2加入50ml圆底烧瓶中，加压泵入10ml无水dmf作为反应溶剂充分溶解。将圆底烧瓶固定于冷却液温度为-30℃的冷却液循环泵中，向反应体系中加入0.15g氢化钠，低温搅拌5min，反应体系不产生气体后缓慢滴加0.55ml的溴化苄，然后将反应体系移至常温下反应14h，tlc[v(石油醚)﹕v(乙酸乙酯)＝4﹕1]监测直至反应完全，停止反应。将反应后物料转移至2000ml圆底烧瓶中，加入大量去离子水淬灭反应，然后于70℃旋干，加乙酸乙酯(2次，每次50ml)、去离子水(2次，每次20ml)萃取，合并有机相后加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干滤液，采用石油醚-乙酸乙酯重结晶得到化合物ⅶ2。
实施例23
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ1及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ1。
实施例24
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ3及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ3。
实施例25
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ4及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ4。
实施例26
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ5及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ5。
实施例27
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ6及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ6。
实施例28
本实施例提供了香草醛异噁唑类化合物ⅶ7及其制备方法，参考实施例22的合成路线，区别仅在于：将步骤(v)中的化合物ⅳ2替换为等摩尔的ⅳ7。
上述各实施例制成的28种化合物的理化数据如下表1所示，核磁共振氢谱1hnmr、13cnmr数据见表2。
28种化合物的结构通式为：
表1各化合物的理化数据
表2各化合物的1hnmr、13cnmr表征数据
实验例1
杀菌活性测定
(1)实验材料如下：
菌种来源：中国农业科学院植物保护研究所、北京农学院植物保护实验室农药组实验室。
供试菌种：烟草灰霉病、层出镰刀菌、木贼镰刀菌、玉米圆斑病、胶胞炭疽菌、草茎点霉。
pda培养基：土豆200g/l，琼脂15g/l，葡萄糖20g/l，加去离子水定容至1l。
仪器：spx-250b-z型生化培养箱、移液枪(德国eppendorf公司)、sw-cj-1fd型单人单面净化工作台、ldzx-50kbs立式压力蒸汽灭菌器。
试剂：丙酮、乙醇(分析纯，北京化学试剂公司)，双炔菌酰胺(先正达南通作物保护有限公司)。
供试药剂：包括表1中的28种香草醛异噁唑类化合物，以及对照药剂双炔菌酰胺。
(2)实验方法包括：
含药培养基制备：将药剂分别溶解于丙酮，均配成浓度5000μg/ml供试药液，保存于4℃冰箱，备用。分别从5000μg/ml药液吸取1.0ml定容至pda培养基共100ml，制成质量浓度为50μg/ml含药培养基。将含药培养基倒入9个直径为9cm的培养皿中，制成11ml/皿含药培养基平板。
(3)杀菌活性测定：采用菌丝生长速率测定法检测质量浓度50μg/ml的含药培养基对植物病原真菌菌丝生长的抑制率i。
将菌株在pda培养基平板上活化5d后，于菌落边缘打取直径为6mm的菌块分别接种到不同含药培养基平板。以50μg/ml含双炔菌酰胺培养基为药剂对照，1％含丙酮培养基为试剂对照，同时设空白对照，均3次重复。置于25℃培养箱中避光培养。当空白对照的菌落长至6～7cm时，以十字交叉法测量各菌落直径，取平均值。
以校正后的空白对照和各含药培养基平板中菌落平均直径计算抑制率，公式如下：
香草醛异噁唑类化合物在50μg/ml质量浓度下的抑菌活性数据见表3。
表3不同化合物对六种病原菌的抑制活性初筛结果(50μg/ml)
从上表中可知，在50μg/ml质量浓度下，28个香草醛异噁唑类化合物对6种植物病原真菌菌丝生长均具有一定抑制作用。不同病原菌对28个香草醛异噁唑类化合物的敏感性存在一定差异，绝大部分香草醛异噁唑类化合物对不同病原菌的抑制率均高于双炔菌酰胺对其的抑制率。其中，烟草灰霉病菌对香草醛异噁唑类化合物的敏感度最高，对其菌丝生长抑制率高于78％的化合物有21个；层出镰刀菌病菌丝生长抑制率高于16％的化合物有19个；木贼镰刀菌病菌丝生长抑制率高于24％的化合物有16个；玉米圆斑病菌丝生长抑制率高于18％的化合物有26个；胶胞炭疽菌病菌丝生长抑制率高于28％的化合物有21个；玉米圆斑病菌丝生长抑制率高于23％的化合物有13个。
香草醛异噁唑类化合物ⅴ2(r1＝ac；r2＝c6h5-)的抑菌活性最强，对5种菌株均产生57％以上的抑制率，对烟草灰霉病菌、玉米圆斑病菌，胶胞炭疽病菌和草茎点霉病菌4种菌株的抑制率达到79％以上。香草醛异噁唑类化合物ⅳ2(r1＝h；r2＝c6h5-)次之，对4种病原菌产生69％以上的抑制率。香草醛异噁唑类化合物ⅴ4(r1＝ac；r2＝4-f-c6h4-)对4种病原菌产生50％以上的抑制效果。ⅳ3(r1＝h；r2＝4-cl-c6h4-)、ⅳ5(r1＝h；r2＝4-ch3-c6h4-)、ⅴ1(r1＝ac；r2＝4-och3-c6h4-)、ⅴ6(r1＝ac；r2＝4-c2h5-c6h4-)对3种菌株的抑制效果均大于50％。ⅳ6(r1＝h；r2＝4-c2h5-c6h4-)对烟草灰霉病菌表现出93％的抑菌效果。
对比r1取代基的种类对抑菌活性的影响，以对6种供试菌种的抑菌率≥60％的化合物数目为参考，r1为乙酰基ac的化合物的抑制活性最好，r1为h的化合物的抑制活性次之，r1为苄基bn、炔丙基-c3h3的化合物的抑制活性相对较低。对比r2取代基的种类对抑菌活性的影响，以对6种供试菌种的抑菌率≥60％的化合物数目为参考，r2为c6h5-的化合物的抑制活性最好，r2为4-c3h7-c6h4-的化合物的抑制活性相对较低。
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