白蛋白原液中即为人血白蛋白原液(取 样进行原液检测）； (7) 半成品配制： 测定人血白蛋白原液中蛋白质含量，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋 白质120?130毫摩尔称取氯化钠，称取后用注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再将人 血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度195?200g/L，用pH4. 0醋酸缓冲液或lmol/L的碳酸氢钠 调整pH值6. 8?7. 0 ; (8) 巴氏灭活分装孵化： 将步骤（7)制备的蛋白质浓度195?200g/L的人血白蛋白原液进行60°C、10小时灭活 病毒，灭活后除菌分装和孵放，孵放过程保持温度30?32°C，孵放多14天，进行二次灯检， 合格品即为人血白蛋白成品，得率为2. 93?2. 94%，包装入库。
[0013] 实施例3 本发明在具体实施中，还可由以下步骤实现： (1)、血浆的合并与融化：破袋后并入清洁的融浆罐内，开启融浆罐，搅拌及融浆温控 器，在水温< 35°C，使融浆罐内血浆融化，温度保持在2?3°C; (2)、组分I+II+III的制作和压滤分离：计量合并后血浆体积，用pH4.O醋酸缓冲液调 节混合血浆pH值6. 9，打开循环冷却系统给血浆降温，待血浆降温至(TC后，加入-17°C质量 浓度为95%的乙醇；加入乙醇速度60L/h，使制品最终乙醇浓度达到体积比20%(v/v)，在加 入乙醇过程中，温度始终不得高于〇°C，最终血浆温度控制在-5. 3°C，乙醇加完后继续搅拌 2小时以上，保持溶液pH为6. 9 ;再向每千升溶液中加入硅藻土和珍珠岩各3kg，搅拌均匀 (一般搅拌30分钟)，在温度-5. 3°C、压力0. 20MPa下压滤，用洁净压缩冷空气吹出压滤机中 残留液体，再用20%的乙醇组分I+II+III(又称FI+II+III)平衡液冲洗，冲洗液并入到滤 液，得到组分I+II+III上清液； (3) 、组分IV的制作和压滤分离：步骤（2)制备的组分I+II+III上清液中按体积比加 入1/10体积的〇°C生理盐水，用pH4. 0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5. 9,加入-17°C质量 浓度95%乙醇，使乙醇浓度达到体积比40% (v/v)，加乙醇速度80L/h，在加入乙醇过程中温 度控制在-3. (TC，边加乙醇边降温，使组分I+II+III上清液最终温度控制在-5. 3°C，乙醇 加毕继续搅拌2小时，保持pH为5. 9 (否则应矫正至此范围内）；向每千升溶液中加入硅藻 土和珍珠岩各3kg，搅拌30分钟后开始压滤，压滤的过程中，工作压力控制在0. 2MPa之内， 滤液温度控制在-5. 3°C，压滤后，用洁净压缩冷空气吹出压滤机中残留液体，再用质量浓度 40%乙醇组分IV平衡液冲洗，冲洗液并入到滤液中，得组分IV上清液(又称FIV上清液）； (4) 组分FV制作与分离：步骤（3)制备的IV上清液用2mol/LHAc-40%乙醇(质量浓度） 溶液缓慢调整pH值为4. 85,滴加时速度190ml/min，边加边降温，最终温度控制在-9°C，滴 加完毕后继续搅拌1小时，保持PH为4. 85 (否则应矫正至此范围内），静置2小时以上压 滤，压滤过程中，工作压力0. 20MPa，滤液温度控制在-7. (TC，压滤后，用提前预冷的洁净压 缩空气吹出压滤机内的残留液，收集沉淀，得组分V; (5) 组分V精制纯化： ① 组分V沉淀用5倍体积（V/V)的体积浓度8%的乙醇溶液搅拌溶解，沉淀完全溶解后， 测量组分V溶液pH为4. 6,在温度-3. (TC继续搅拌2. 5小时，压滤； ② 压滤：压滤过程中搅拌不停，压滤完后，用低温冷空气吹出滤器内液体，至出气泡后 停止，再用组分V平衡液冲洗滤板，冲洗液并入到过滤液中得到纯化液； (6) 超滤： ① 搅拌：用IM碳酸氢钠调整纯化液pH值至7. 1 ; ② 将纯化液超滤浓缩至蛋白浓度125g/L，用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透析，再 用3倍的注射用水透析得到白蛋白原液，将白蛋白原液超滤浓缩至蛋白质含量215g/L，用 注射用水洗涤超滤膜，收集洗膜液，并入上述白蛋白原液中即为人血白蛋白原液(取样进行 原液检测）； (7) 半成品配制： 测定人血白蛋白原液中蛋白质含量，按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠，按每克蛋 白质120?130毫摩尔称取氯化钠，称取后用注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再将人 血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度198g/L，用pH4. 0醋酸缓冲液或lmol/L的碳酸氢钠调整 pH值 6. 9 ; (8) 巴氏灭活分装孵化： 将步骤（7)制备的蛋白质浓度198g/L的人血白蛋白原液进行60°C、10小时灭活病毒， 灭活后除菌分装和孵放，孵放过程保持温度31°C，孵放14天，进行二次灯检，合格品即为人 血白蛋白成品，平均得率为2. 935%，包装入库。
[0014] 本发明经多次试验，均取得了相同或相近似的结果，其得率稳定在2. 95-2. 97%之 间，均得率为2. 96%，如将三批血浆每批平均一分为二，分别采用现有方法和本发明方法来 制备人血白蛋白，结果如下表：
【主权项】
1. 一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法，包括血浆的合并与融化、组分 I+II+III的制作和压滤、组分IV的制作和压滤、组分V的制作和压滤、组分V沉淀溶解 过滤、FV精制纯化、超滤透析浓缩、配制、巴氏灭活、除菌灌装、孵放和检定，其特征在于，所 述的组分IV的制作和压滤，在制备的组分I+II+III上清液中按体积比加入1/10体积的 〇°C生理盐水，用pH4. 0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5. 80?5. 90,加入-15°c以下的体积 浓度为95%乙醇，使最终乙醇体积浓度达到40%。
2. 根据权利要求1所述的从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法，其特征在于， 加入-15°C以下的体积浓度为95%乙醇的速度为< 80L/h，在加入乙醇过程中温度控制 在-2. (TC以下，边加乙醇边降温，使组分I+II+III上清液最终温度控制在-5. 0?-5. 5°C， 乙醇加毕继续搅拌2小时，保持pH为5. 80?5. 90 ;向每千升溶液中加入硅藻土和珍珠岩 各2?4kg，搅拌30分钟后开始压滤，压滤的过程中，工作压力控制在0. 2MPa之内，滤液温 度控制在-4. 5°C?-5. 5°C，压滤后，用洁净压缩冷空气吹出压滤机中残留液体，再用40%乙 醇组分IV平衡液冲洗，冲洗液并入到滤液中，得组分IV上清液。
3. 根据权利要求2所述的从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法，其特征在于，所 述的40%乙醇组分IV平衡液由95%乙醇溶液420L、枸橼酸钠3. OKg和NaCl 4. OKg加注射 用水至1000L制成，用pH 4. OHAc-NaAc缓冲液调整平衡液pH 5. 80?5. 90,温度-4. 5°C? 5. 5°C。
【专利摘要】本发明涉及从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法，可有效解决既从血浆中提取回收人血白蛋白和提高得率的问题，其解决的技术方案是，该方法包括以下步骤：血浆的合并与融化、组分I+II+III的制作和压滤、组分IV的制作和压滤、组分V的制作和压滤、组分V沉淀溶解过滤、组分V精制纯化、超滤透析浓缩、配制、巴氏灭活、除菌灌装、孵放和检定，所述的组分IV的制作和压滤，在制备的组分I+II+III上清液中按体积比加入1/10体积的0℃生理盐水，用pH4.0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5.80～5.90，加入-15℃以下的体积浓度为95%乙醇，使最终乙醇体积浓度达到40%，发明生产工艺更加流畅简洁，并且提高了人血白蛋白得率，经济和社会效益巨大。
【IPC分类】C07K14-765, C07K1-34
【公开号】CN104558156
【申请号】CN201510033390
【发明人】雷文成, 吕勇, 时凯, 陈惠珍
【申请人】郑州莱士血液制品有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月23日