一种降解含酚的嗜盐菌菌剂的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及菌剂制备领域，特别是涉及一种降解含酚的嗜盐菌菌剂的制备方法。
【背景技术】
[0002] 工业园区内废水具有排放量大，污染范围广，排放方式复杂；污染物种类繁多，浓 度波动幅度大；污染物质毒性强，危害大，污染物排放后迁移变化规律差异大；恢复比较困 难等特点。
[0003] 工业园区废水内含酚废水主要来自焦化厂、煤气厂、石油化工厂、绝缘材料厂等工 业部门以及石油裂解制乙烯、合成苯酚、聚酰胺纤维、合成染料、有机农药和酚醛树脂生产 过程。含酚废水中主要含有酚基化合物，如苯酚、甲酚、二甲酚和硝基甲酚等。酚基化合物是 一种原生质毒物，可使蛋白质凝固。水中酚的质量浓度达到0. 1?0. 2mg/L时，鱼肉即有异 味，不能食用；质量浓度增加到lmg/L，会影响鱼类产卵，含酚5?10mg/L，鱼类就会大量死 亡。饮用水中含酚能影响人体健康，即使水中含酚质量浓度只有〇. 〇〇2mg/L，用氯消毒也会 产生氯酚恶臭。通常将质量浓度为l〇〇〇mg/L的含酚废水.称为高浓度含酚废水，这种废水 须回收酚后，再进行处理。质量浓度小于l〇〇〇mg/L的含酚废水，称为低浓度含酚废水。通 常将这类废水循环使用，将酚浓缩回收后处理。回收酚的方法有溶剂萃取法、蒸汽吹脱法、 吸附法、封闭循环法等。含酚质量浓度在300mg/L以下的废水可用生物氧化、化学氧化、物 理化学氧化等方法进行处理后排放或回收。
[0004] 生物处理技术因其具有经济高效的特点而被广泛地应用于污水处理中，但微生物 生长对环境的渗透压有一定的要求，环境中的渗透压应在微生物细胞质膜所能承受的压力 范围内，而渗透压的大小与溶液浓度成正比，溶液中无机盐浓度越高，则渗透压越高。微生 物在低渗透压溶液（NaCl质量分数0. 01% )中，溶液中水分子大量渗入微生物体内，使微生 物细胞发生膨胀，严重者破裂；而在高渗透压环境中，微生物体内水分子大量渗到体外环境 中，结果导致细胞发生质壁分离使生长受到抑制，严重者死亡。
[0005] 嗜盐菌，特别是极端嗜盐菌的细胞内具有相当高的离子浓度，且细胞壁成份特殊， 不含肽聚糖而以脂蛋白为主。这种细胞壁结构的完整由离子键维持，高浓度对于其细胞壁 蛋白质亚单位之间的结合，保持细胞结构的完整性是必需的。当环境中的盐浓度较低时， 一方面细胞壁蛋白解聚为蛋白质单体，使胞壁失去完整；另一方面，细胞内外离子浓度平衡 打破，细胞吸水膨胀，最终引起胞壁破裂，菌体完全自溶。嗜盐菌酶的产生、稳定和活性发挥 都需要高盐浓度。生物体内酶的产生、稳定和活性发挥都需要一定的理化条件。嗜盐菌的 酶是嗜盐性的。它的产生、稳定和发挥活性需要高盐浓度条件。而目前并没有很好制备嗜 盐菌，特别是降解含酚的嗜盐菌的方法。
【发明内容】
[0006] 基于上述现有技术所存在的问题，本发明提供一种降解含酚的嗜盐菌菌剂的制备 方法，能利用工业园区内化工厂排放的高含盐废水的活性污泥，制备用于水处理的降解含 酚的嗜盐菌。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明提供一种降解含酚的嗜盐菌菌剂的制备方法，其特 征在于，包括：
[0008] (1)制作菌悬液：
[0009] 选取工业园区内化工厂排放的含盐量为3%?15%的高含盐废水的活性污泥制 成菌悬液；
[0010] (2)分离筛选嗜盐菌：
[0011] 取所述菌悬液在嗜盐菌分离筛选培养基制成的平板上划线分离筛选嗜盐菌得到 嗜盐菌菌液；
[0012] (3)分离筛选降解含酚的嗜盐菌：
[0013] 将蛋白腺5?15g，酵母骨1?10g，NaC15?15g，苯酌· 0· 1?0· 2g，蒸馈水IOOOml 混合后，将pH值调为7. 0?7. 2,于121 °C灭菌20分钟配制成LB苯酚培养基；
[0014] 在所述LB苯酚培养基平板中加入牛津杯，在牛津杯中加入步骤2得到的所述嗜盐 菌菌液，用不加菌液的牛津杯做为对照，37°C，培养24?36h，选取与对照相比透明圈大5mm 以上的菌液为降解苯酚的嗜盐菌，在所述降解含酚的嗜盐菌中加入稳定剂和保护剂即完成 降解含酚的嗜盐菌菌剂的制备。
[0015] 上述方法中，所述稳定剂采用甘油、乙醇、乙二醇中的一种或多种，加入量为所述 降解含酚的嗜盐菌重量的〇. 5?5% ;所述保护剂采用沸石粉、硅藻土、粉末活性炭中的一 种或多种，加入量为所述降解含酚的嗜盐菌重量的1?10%。
[0016] 上述方法中，所述制作菌悬液步骤中，将高含盐废水的活性污泥制成菌悬液的方 式如下：
[0017] 采集200ml的废水水样放入烧杯，用滤纸过滤，然后盛放到离心管中，以12000r/ min速度离心30min，倒出上清液，将全部上清液通过细菌滤器过滤，然后取下过滤膜，将过 滤膜放入含有无菌水样的烧杯中，使滤纸充分浸泡得到溶液；用灭菌的移液管取出Iml的 所述溶液放入无菌的试管中，向该试管中加入9ml无菌水，充分震荡后，让其充分混合，即 制成菌悬液。
[0018] 上述方法中，所述分离筛选嗜盐菌步骤中，所用的嗜盐菌分离筛选培养基为：由牛 肉膏 2 ?5g，蛋白胨 5 ?15g，NaC15 ?15g，Na2S043 ?10g，KCl 0· 5 ?I. 5g，NaHC030. 1 ? lg，KBr 0· 1 ?I. 5g，H3B030. 01 ?0· 15g，NaF 0· 001 ?0· 015g，MgCl2l ?15g 和 CaCl2O. 5 ? I. 5g，加蒸馏水至1000ml，pH值调为7. 0?7. 2后，经121°C灭菌20分钟制得的培养基。
[0019] 本发明的有益效果为：制得的降解含酚废水的嗜盐菌菌剂适用性较宽泛，可用于 工业园区内焦化废水、化工污水等一系列含酚废水的处理，结合不同的处理工艺，可达到很 好的处理效果。
【具体实施方式】
[0020] 下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例 仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术 人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。 方法：
[0021] 本发明实施例提供一种降解含酚废水的嗜盐菌菌剂及其制备方法，用于高浓度含 酚废水的生物治理，具体包括以下步骤：
[0022] (1)样品的采集制备菌悬液：
[0023] 选取工业园区内化工厂排放的高含盐废水的活性污泥作为样品，废水的含盐量为 3%?15%。
[0024] 采集200ml的水样放入烧杯，用滤纸过滤，然后盛放到离心管当中，以12000r/min 速度离心30min，倒出上清液，将全部上清液通过细菌滤器过滤，然后取下过滤膜，将其放入 含有无菌水样的烧杯中，使滤纸充分浸泡。用灭好菌的移液管取出Iml该溶液放入无菌的 试管中，向该试管中加入9ml无菌水，充分震荡后，让其充分混合，制成菌悬液；
[0025] (2)分离筛选嗜盐菌：
[0026] 取菌悬液在嗜盐菌分离筛选培养基制成的平板上划线，分离筛选嗜盐菌。嗜盐 菌分离筛选培养基的组成有牛肉膏3g，蛋白胨7g，NaC16g，Na 2S048g，KCl lg，NaHCO3O. 5g， KBrO. 4g，H3BO3O. 12g，NaF 0· 008g，MgCl29g，CaCl2Ig,加蒸馏水至 1000ml，pH 值调为 7. 0 ? 7.2。121°C灭菌 20min 制得。
[0027] 3、分离筛选降解含酚的嗜盐菌：
[0028] 配制LB苯酚培养基。蛋白胨10g，酵母膏9g，NaCl 15g，苯酚0· 2g，蒸馈水1000ml, pH值调为7.0?7.2。121°C灭菌20min制得。
[0029] 在LB苯酚培养基平板中加入牛津杯，在牛津杯中加入嗜盐菌菌液，用不加菌液的 牛津杯做为对照，37°C，培养24h。选取与对照相比透明圈大5mm以上的菌液为降解苯酚的 嗜盐菌。
[0030] (4)在降解含酚的嗜盐菌中加入稳定剂和保护齐IJ。稳定剂采用甘油、乙醇、乙二醇 中的一种或多种，加入量为降解含酚的嗜盐菌重量的〇. 5?5% ;保护剂采用沸石粉、硅藻 土、粉末活性炭中的一种或多种，加入量为降解含酚的嗜盐菌重量的1?10%。
[0031] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0032] 实施例1
[0033] 本实施例提供一种制备降解含酚的嗜盐菌菌剂的方法，包括以下步骤：
[0034] (1)样品的米集制备囷悬液：
[0035] 选取工业园区内化工厂排放的高含盐废水的活性污泥作为样品，废水的含盐量为 8% ；
[0036] 采集200ml的水样放入烧杯，用滤纸过滤，然后盛放到离心管当中，以12000r/min 速度离心30min，倒出上清液，将全部上清液通过细菌滤器过滤，然后取下过滤膜，将其放入 含有无菌水样的烧杯中，使滤纸充分浸泡；用灭好菌的移液管取出Iml该溶液放入无菌的 试管中，向该试管中加入9ml无菌水，充分震荡后，让其充分混合制成；
[0037] (2)分离筛选嗜盐菌：
[0038] 取菌悬液在嗜盐菌分离筛选培养基制成的平板上划线，分离筛选嗜盐菌。嗜盐菌 分离筛选培养基的组成有牛肉膏2?5g，蛋白胨5?15g，NaC15?15g，Na 2S043?10g，KCl 0· 5 ?I. 5g，NaHCO3O. 1 ?lg，KBr 0· 1 ?I. 5g，H3BO3O. 01 ?0· 15g，NaF 0· 001 ?0· 015g， MgCl2I ?15g，CaCl2O.