污染，而且可同时完成定量分析。
[0044] 4)采用本发明检测方法在同一反应体系即可实现同时检测玉米Zein基因和 CBH351基因，操作简便、快速，成本低，检测结果准确。
【附图说明】
[0045] 图1为仅有玉米Zein基因检出的扩增曲线图；
[0046] 图2为仅有玉米Zein基因检出的HRM分析图；
[0047] 图3为仅有CBH351检出的扩增曲线图；
[0048] 图4为仅有CBH351检出的的HRM分析图；
[0049] 图5为玉米Zein基因和CBH351基因同时检出的扩增曲线图；
[0050] 图6为玉米Zein基因和CBH351基因同时检出的HRM分析图；
【具体实施方式】
[0051] 下面结合【具体实施方式】对本发明做进一步描述：
[0052] 实施例1
[0053] 本发明检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因 Zein的引物，其中该引物的序列 分别为：
[0054] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0055] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0056] 上游引物 CBH35IF :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0057] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0058] 实施例2
[0059] 本发明一种检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因 Zein的试剂盒，其中该试剂 盒中20 μ L反应体系包括以下组分：
[0060] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZeinF 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZeinR 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0.5 U L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351R 0.5 μ L DNA模版 IpL 水 补齐至20 μ L。
[0061] 其中引物序列如下：
[0062] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0063] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0064] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0065] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0066] 实施例3
[0067] 本发明检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因 Zein的试剂盒，其中20. 0 yL反 应体系由以下组分组成：
[0068] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZEIN F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZEIN R 0.05 μ L
[0069] 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351 R 0.05 μ L DNA模版 IuL 水 补齐至20 μ L。
[0070] 其中：
[0071] 其中引物序列如下：
[0072] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0073] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0074] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0075] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0076] 实施例4
[0077] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0078] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZEINF 0 8 PL 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZEIN R 0.8 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0.9 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351 R 0.9 μ L DNA模版 I UL 水 补齐市20 μ L。
[0079] 其中引物序列如下：
[0080] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0081] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0082] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0083] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0084] 实施例5
[0085] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0086] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZEIN F 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZEIN R 0.05 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0.9 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351 R 0 9 UL DNA模版 IuL 水 补齐至20 μ L。
[0087] 其中引物序列如下：
[0088] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0089] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0090] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0091] 下游引物 CBH35IR :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0092] 实施例6
[0093] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0094] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZEIN F OSuL 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZEIN R 0.8 μ L 终浓度0.5 pmo]/L的上游引物CBH351 F 0.05 μ L
[0095] 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351 R 0.05 μ L DNA模版 I PL 水 补齐生20 μ L。
[0096] 其中引物序列如下：
[0097] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0098] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0099] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0100] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0101] 实施例7
[0102] 本发明试剂盒中制备20 μ L反应体系由以下组分组成：
[0103] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZEIN F 0 6 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZEIN R 0.6 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0 7 UL 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351 R 0 7 PL DNA模版 IpL 水 补齐至20 μ L。
[0104] 其中引物序列如下：
[0105] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0106] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0107] 上游引物 CBH351F :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0108] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0109] 实施例8
[0110] 本发明检测转基因抗虫玉米CBH351及内源基因 Zein用的方法，
[0111] 包括以下步骤：
[0112] A、提取样品DNA ;
[0113] B、对步骤A中的样品DNA进行荧光PCR扩增，其中反应体系由以下组分组成：
[0114] 终浓度I X的HRM反应预混液 IOuL 终浓度0.5 pmol/L的上游引物ZeinF 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物ZeinR 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的上游引物CBH351 F 0.5 μ L 终浓度0.5 pmol/L的下游引物CBH351R 0.5 μι DNA模版 IaL 水 补齐至20 μ L。
[0115] 其中引物序列如下：
[0116] 上游引物 ZeinF :TTATGCTCCTTGGTCTTT
[0117] 下游引物 ZeinR :GTAATAGGGCTGATGATTG
[0118] 上游引物 CBH35IF :TATGTTACTAGATCGCAGAT
[0119] 下游引物 CBH351R :AAGGTCCAATAGTGTATGT。
[0120] 所述的荧光PCR扩增按以下步骤进行：
[0121] (1)92°C~96°C预变性 30s ;
[0122] (2) 92°C~96°C变性5s~10s，55°C~65°C退火20s~40s，共进行35~45个循 环。
[0123] C、对扩增后的产物进行HRM分析后判定结果。
[0124] 其中对PCR扩增产物进行HRM分析，按以下步骤进行：
[0125] (1)92°C ~96°C 变性 Imin ;
[0126] (2) 40 °C 复性 Imin ;
[0127] (3)然后初始熔解温度60°C~65°C，开始程序升温熔解至92°C~96°C，并在熔解 过程中实时检测荧光信号，15~25次/