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[0198] 以上对本发明的特定实施例进行了说明，但本发明的保护内容不仅仅限定于以上 实施例，在本发明的所属技术领域中，只要掌握通常知识，就可以在其技术要旨范围内进行 多种多样的变更。
【主权项】
1. 一种可抑制埃博拉病毒基因复制的活性分子，其特征在于：所述活性分子为小干扰 核苷酸siRNA分子或两种以上所述SiRNA分子的组合物，所述活性分子和导入载体组装成 纳米颗粒制剂，所述活性分子靶向埃博拉病毒RNA的保守区域。2. 根据权利要求1所述的活性分子，其特征在于：所述组合物由至少两条siRNA双链 组成，其革G向埃博拉病毒RNA的保守区域，所述病毒为扎伊尔埃博拉病毒（EBOV)、苏丹埃博 拉病毒（SUDV)、塔伊森林埃博拉病毒（TAFV)、雷斯顿埃博拉病毒（RESTV)或本迪布焦埃博 拉病毒（BDBV)亚型。3. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述埃博拉病毒RNA的保守区 域为 VP24、VP30、VP35、VP40 或 L 聚合酶 RNA。4. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述埃博拉病毒RNA的保守区 域为VP24、VP30、VP35、VP40或L聚合酶RNA的一部分。5. 根据权利要求1所述的活性分子，其特征在于：所述导入载体为聚合物载体或脂质 体载体。6. 根据权利要求5所述的活性分子，其特征在于：所述聚合物载体为组氨酸-赖氨酸 共聚物（HKP)，该载体能包裹siRNA形成HKP/siRNA纳米颗粒。7. 根据权利要求5所述的活性分子，其特征在于：所述脂质体载体为精胺-脂质体-胆 固醇（SLiC)，此载体能包裹siRNA形成SLiC/siRNA纳米颗粒。8. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述组合物由三条具有平末端 结构的25个碱基的siRNA双链组成，靶向VP24、VP35或LP RNA的保守区域，如CTOl (25) 的组成：VP24(3) :5' -guggaagguuuauugggcugguauu_3,，VP35(4) :5' -cuucauuggcuacuguugt gcaaca-3'和 LP(5):5' -cauuaaguacacaaugcaagaugcu_3, 〇9. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述组合物由三条具有dtdt 悬挂端结构的21个碱基的siRNA双链组成，靶向VP24、VP35或LP RNA的保守区域，如 CTOl (21)的组成：VP24(9) :5, -ggacgauacaaucuaauaudtdt-3,，VP35(9) :5, -gagcagcuaaug accggaadtdt-3'和 LP (9):5' -gaccaaugugaccuugucadtdt_3, 〇10. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述组合物由两条具有钝端 结构的25个碱基的siRNA双链组成，靶向VP24和VP35 RNA的保守区域，如PA02 (25)= (VP24-VP35)siRNA:VP24(5):5'-gcauggucaaugacaaggaaucucu-3' 和 VP35(5)5'-cgaauagc aaaccuugaggccagcu-3' 〇11. 根据权利要求1或2所述的活性分子，其特征在于：所述组合物由两条具有dtdt悬 挂端结构的21个碱基的siRNA双链组成，靶向VP24和VP35 RNA的保守区域，如PA02 (21) =(VP24_VP35)siRNA:VP24(13):5 '-ccucgacacgaaugcaaagdtdt-3，和 VP35(13):5，_gcaa accuugaggccagcudtdt_3, 〇12. 根据权利要求8或9所述的活性分子，其特征在于：所述siRNA组合物为CT01，或 CT02,或CT03,或CT04,或CT05,或CT06,或CT08,每个组合物都含有三条siRNA。13. 根据权利要求10或11所述的活性分子，其特征在于：siRNA配对为PA01，或PA02， 或PA03,或PA04,或PA05,或PA06,或PA07,或PA08,或PA09,或PA10,每个组合物都含有两 条 siRNA。14. 根据权利要求6所述的活性分子，其特征在于：所述HKP/siRNA纳米颗粒由含有三 条siRNA双链或两条siRNA双链的siRNA组合物构成。15. 根据权利要求7所述的活性分子，其特征在于：所述SLiC/siRNA纳米颗粒由含有 三条siRNA双链或两条siRNA双链的siRNA组合物构成。16. 根据权利要求14或15所述的活性分子，其特征在于：siRNA双链由具有钝端的 25mer的siRNA或具有dTdT悬挂端的21mer的siRNA组成。17. -种权利要求1所述的可抑制埃博拉病毒基因复制的活性分子在细胞和动物模型 中检测沉默埃博拉病毒基因的分子活性的方法。18. -种权利要求1所述的可抑制埃博拉病毒基因复制的活性分子抑制埃博拉病毒复 制的方法。19. 一种权利要求1所述的可抑制埃博拉病毒基因复制的活性分子检测埃博拉感染的 诊断方法。20. 根据权利要求17或18或19所述的方法，其特征在于：用于检测HKP/siRNA纳米 颗粒或SLiC/siRNA纳米颗粒制剂抗埃博拉病毒活性的细胞培养，唯一地定义为Vero E6细 胞培养。21. 根据权利要求20所述的方法，其特征在于：用于检测HKP/siRNA纳米颗粒或SLiC/ siRNA纳米颗粒制剂抗埃博拉病毒活性的细胞培养，首先采用双荧光素梅报告基因载体 psiCHECK-2进行试验，psiCHECK-2包含VP24、VP30、VP35、VP40和聚合酶L的基因片段。22. 根据权利要求21所述的方法，其特征在于：siRNA药物制剂的抗埃博拉活性可以 通过测定病毒基因的沉默来检测，具体方法为RT_PCT、RACE分析、核酸杂交检测（Northern Blot)、蛋白杂交分析（Western Blot)或其他检测方法。23. 根据权利要求17或18或19所述的方法，其特征在于：用于检测HKP/siRNA纳米 颗粒或SLiC/siRNA纳米颗粒制剂抗埃博拉病毒活性的动物模型，唯一地定义为埃博拉病 毒感染豚鼠模型。24. 根据权利要求17或18或19所述的方法，其特征在于：用于检测HKP/siRNA纳米 颗粒或SLiC/siRNA纳米颗粒制剂抗埃博拉病毒活性的动物模型，唯一地定义为埃博拉病 毒感染的非人类灵长类动物模型。25. 根据权利要求17或18或19所述的方法，其特征在于：用于检测抗埃博拉病毒活 性的siRNA药物也可以和RGD-PEG-HKP三重纳米颗粒（RPH)制成制剂，RGD-PEG-HKP具有 靶向内皮细胞表面因子的独特性质，如内皮细胞表面的整合素受体亚型VP 3和VP 5。26. 根据权利要求17或18或19所述的方法，其特征在于：载体/siRNA纳米颗粒制剂 可冻干成冻干粉末用于储存和转运，并可用注射液溶解用于病人输液。
【专利摘要】本发明涉及一种可抑制埃博拉病毒基因复制的活性分子，其由HKP或SLiC或RPH载体和siRNA鸡尾酒的纳米颗粒制剂组成，用于埃博拉病毒感染的预防和治疗。具体涉及靶向埃博拉病毒的siRNA分子鸡尾酒；靶向埃博拉病毒基因保守区域的鸡尾酒siRNA的组合物；siRNA鸡尾酒和组氨酸-赖氨酸共聚物(HKP)纳米颗粒，或和精胺-脂质-胆固醇(SLiC)纳米颗粒所形成制剂的组成；siRNA鸡尾酒和HKP或SLiC纳米颗粒所形成制剂的组成，所形成的制剂用内皮细胞表面受体特异性的或红细胞表面受体特异性的Arg-Gly-Asp(RGD)多肽配体修饰，称为RGD-PEG-HKP(RPH)载体系统；在细胞培养中测试新型siRNA制剂的方法，在豚鼠和猴子模型中测试新型siRNA制剂的方法；以及在人用注射液中检测含纳米颗粒的siRNA制剂的方法。
【IPC分类】C12N15/113, A61P31/14, C12Q1/68, A61K48/00
【公开号】CN105063044
【申请号】CN201510185576
【发明人】徐军, 蔡以滨, 陆阳
【申请人】苏州圣诺生物医药技术有限公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年4月17日