肽及其复合物、组织修复用支架及其表面处理方法、以及表面处理液或处理液组的制作方法_3

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子结合于与支架的表面所承载的粘接性肤所具有的 碱性部位结合的糖胺聚糖。为了使细胞生长因子结合于与支架的表面所承载的粘接性肤所 具有的碱性部位结合的糖胺聚糖,通常使表面承载有碱性部位结合有糖胺聚糖的粘接性肤 的支架与糖胺聚糖溶液接触。表面承载有碱性部位结合有糖胺聚糖的粘接性肤的支架与糖 胺聚糖溶液的接触通过与工序(1)中的支架与粘接性肤溶液的接触同样的方法进行。
[0080] 当将表面承载有碱性部位结合有糖胺聚糖的粘接性肤的支架在细胞生长因子溶 液中浸溃而进行处理时,浸溃时的溫度、时间只要细胞生长因子对糖胺聚糖的结合良好地 进行,就没有特别限定。典型而言,浸溃在5~70°C进行,优选在5~30°C进行。此外,浸 溃时间优选为0. 1~48小时,更优选为1~24小时。
[0081] 表面处理时所用的细胞生长因子溶液的浓度没有特别限定。典型而言,细胞生长 因子溶液的浓度优选为1~1,000μg/mL,更优选为10~500μg/mL。
[0082] 表面处理时的细胞生长因子的使用量没有特别限定,W充分量的细胞生长因子能 够结合于糖胺聚糖的方式适当选择,所述糖胺聚糖结合于粘接性肤。 阳08引 圧序(4))
[0084]在工序(4)中,继工序(1)之后,使表面承载有粘接性肤的支架与糖胺聚糖和细胞 生长因子的复合物接触,使糖胺聚糖和细胞生长因子的复合物结合于支架的表面所承载的 粘接性肤所具有的碱性部位。糖胺聚糖和细胞生长因子的复合物可W通过将糖胺聚糖和细 胞生长因子在水那样的溶剂中混合而形成。
[00化]表面承载有粘接性肤的支架与糖胺聚糖和细胞生长因子的复合物的接触优选将 表面承载有粘接性肤的支架在糖胺聚糖和细胞生长因子的复合物的溶液中浸溃而进行。该 浸溃与工序(3)同样地进行。
[0086][第8方式]
[0087] 本发明的第8方式是一种组织修复用支架的表面处理方法,其为使第2方式设及 的包含粘接性肤和糖胺聚糖的复合物与组织修复用支架接触。第2方式设及的复合物与支 架的接触是使用第2方式设及的复合物的溶液,与关于第7方式设及的表面处理方法说明 的工序(1)同样地进行。
[0088] 在第2方式设及的复合物与支架接触后,可W根据需要使表面承载有第2方式设 及的复合物的支架与细胞生长因子接触。通过运样做,细胞生长因子结合于支架的表面所 承载的第2方式设及的复合物中的糖胺聚糖。
[0089] [第9方式]
[0090] 本发明的第9方式是一种组织修复用支架的表面处理方法,其为使第3方式设及 的包含粘接性肤、糖胺聚糖W及细胞生长因子的复合物与组织修复用支架接触。第3方式 设及的复合物与支架的接触是使用第3方式设及的复合物的溶液、与关于第7方式设及的 表面处理方法说明的工序(3)同样地进行。 阳0川[第10方式]
[0092] 本发明的第10方式是含有上述粘接性肤的组织修复用支架的表面处理液。关于 第10方式设及的表面处理液所含的溶剂的种类,只要能够使粘接性肤溶解,在不损害本发 明的目的的范围内就没有特别限定。从粘接性肤的溶解性、对使用支架修复的组织没有不 良影响等方面出发,通常使用水作为表面处理液所含的溶剂。
[0093] 表面处理液的调制方法没有特别限定。当粘接性肤为溶液状态时,通过将含有粘 接性肤的溶液W粘接性肤的浓度成为期望的浓度的方式进行稀释或浓缩而得到表面处理 液。当粘接性肤通过冷冻干燥等方法进行了粉末化时,通过将粘接性肤粉末与水等溶剂按 规定的比率混合使粘接性肤溶解于溶剂而得到表面处理液。
[0094] 表面处理液中粘接性肤的浓度没有特别限定。表面处理液中粘接性肤的优选浓度 与关于第7方式设及的表面处理方法说明的工序(1)中使用的粘接性肤溶液同样。
[0095] 在不损害本发明的目的的范围内,第10方式设及的表面处理液可W含有各种不 会结合于粘接性肤所具有的粘接性部位和碱性部位的添加剂。作为配合于表面处理液的添 加剂,可W列举抑调节剂、渗透压调节剂、表面活性剂、粘度调节剂、稳定剂、着色剂、香料、 抗氧化剂、防腐剂、防霉剂和紫外线吸收剂等。运些添加剂通常按照运些添加剂对于各种药 液而配合的量添加于表面处理液。
[0096] [第 11 方式]
[0097] 本发明的第11方式是一种组织修复用支架的表面处理用的处理液组,其包括第 10方式设及的含有粘接性肤的表面处理液和含有糖胺聚糖的表面处理液。关于含有糖胺聚 糖的表面处理液所含的溶剂的种类,只要能够使糖胺聚糖溶解,在不损害本发明的目的的 范围内就没有特别限定。从糖胺聚糖的溶解性、对使用支架修复的组织没有不良影响等方 面出发,通常使用水作为含有糖胺聚糖的表面处理液所含的溶剂。
[0098] 含有糖胺聚糖的表面处理液中糖胺聚糖的浓度没有特别限定。表面处理液中糖胺 聚糖的优选浓度与关于第7方式设及的表面处理方法说明的工序(2)中使用的糖胺聚糖溶 液同样。含有糖胺聚糖的表面处理液与含有粘接性肤的表面处理液同样地可W含有各种添 加剂。
[0099] 第11方式设及的组织修复用支架的表面处理用的处理液组可W进一步包括含有 细胞生长因子的表面处理液。表面处理液中细胞生长因子的优选浓度与关于第7方式设及 的表面处理方法说明的工序(3)中使用的细胞生长因子溶液同样。含有细胞生长因子的表 面处理液与含有粘接性肤的表面处理液同样地可W含有各种添加剂。
[0100] [第 12 方式] 阳101] 本发明的第12方式是含有第2方式设及的粘接性肤与糖胺聚糖的复合物的表面 处理液。关于第12方式设及的表面处理液所含的溶剂的种类,只要能够使复合物溶解,在 不损害本发明的目的的范围内就没有特别限定。从复合物的溶解性、对使用支架修复的组 织没有不良影响等方面出发,通常使用水作为表面处理液所含的溶剂。
[0102] 含有第2方式设及的复合物的表面处理液的调制方法与第10方式设及的表面处 理液的调制方法同样。表面处理液中复合物的浓度没有特别限定。关于表面处理液中复合 物的浓度,表面处理液中复合物所含的粘接性肤的浓度优选与关于第7方式设及的表面处 理方法说明的工序(1)中使用的粘接性肤溶液的合适的浓度同样。含有粘接性肤与糖胺聚 糖的复合物的表面处理液与第10方式设及的表面处理液同样地可W含有各种添加剂。 阳103][第13方式]
[0104] 本发明的第13方式是一种组织修复用支架的表面处理用的处理液组,其包括第 12方式设及的含有粘接性肤和糖胺聚糖的复合物的表面处理液和含有细胞生长因子的表 面处理液。含有细胞生长因子的表面处理液与关于第11方式说明的表面处理液同样。
[0105] [第14方式]
[0106] 本发明的第14方式是含有第3方式设及的粘接性肤、糖胺聚糖W及细胞生长因子 的复合物的表面处理液。关于第14方式设及的表面处理液所含的溶剂的种类,只要能够使 复合物溶解,在不损害本发明的目的的范围内就没有特别限定。从复合物的溶解性、对使用 支架修复的组织没有不良影响等方面出发,通常使用水作为表面处理液所含的溶剂。
[0107] 含有第3方式设及的复合物的表面处理液的调制方法与第10方式设及的表面处 理液的调制方法同样。表面处理液中复合物的浓度没有特别限定。关于表面处理液中复合 物的浓度,表面处理液中复合物所含的粘接性肤的浓度优选与关于第7方式设及的表面处 理方法说明的工序(1)中使用的粘接性肤溶液的合适的浓度同样。含有粘接性肤、糖胺聚 糖W及细胞生长因子的复合物的表面处理液与第10方式设及的表面处理液同样地可W含 有各种添加剂。 阳10引 实施例 阳109] W下通过实施例对本发明进行说明,但本发明的范围不限于运些实施例。
[0110][实施例^ 阳111] 通过Fmoc固相合成方法,合成从C末端开始的9个残基的序列是下述序列号(1) 的氨基酸序列的、包含下述序列号(2)的氨基酸序列的粘接性肤。
[0112] Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-T虹-Xaa-Lys · · · (1)
[0113] Lys_Lys_Lys_Lys_Lys_Gly_Gly_Gly_Ala_Lys_Pro_Ser_Tyr_Hyp_Thr_Xaa_L ys· · ·似
[0114] (序列号(1)和似中,乂曰曰是心多己残基。)
[0115] 利用反相HPLC对得到的粗制粘接性肤进行精制后,利用MLDI-T0F/MS测定精制 的粘接性肤的分子量。利用MLDI-T0F/MS测定的肤的分子量为2011. 7,与包含序列号(3) 的氨基酸序列的粘接性肤的计算分子量2011. 3大体一致。
[0116] [实施例引
[0117] 将实施例1中得到的粘接性肤溶解于蒸馈水中,调制浓度1.Omg/mL的粘接性肤 水溶液。在50°C,将由a-TCP(a型憐酸Ξ巧)多孔体(细孔的体积占多孔体的体积的约 70% )形成的直径5mm、高度2mm的圆柱形组织修复用支架的基体在0.ImL粘接性肤水溶液 中浸溃24小时,使粘接性肤结合于基体的表面。然后,将基体从粘接性肤水溶液取出,将基 体用20mL蒸馈水洗涂后干燥。通过X射线光电子能谱法狂P巧对干燥后的基体的表面进 行分析,结果,确认到来自肤所含的氮原子的Nls的峰。 阳11引[实施例引
[0119]将粘接性肤水溶液的浓度由1.Omg/mL变更为2.Omg/mU除此W外,与实施例2同 样地操作,用粘接性肤水溶液对组织修复用支架的基体进行处理。对于处理后的组织修复 用支架的基体的表面,与实施例2同样地操作,利用进行分析,结果,确认到来自肤所含 的氮原子的Nls的峰。 阳120][实施例4]
[0121] 室溫下,将实施例2中得到的、用粘接性肤处理过的组织修复用支架的基体在Novo-HeparinQ万单位/lOmL、持田制药株式会社制)中浸溃8小时,使肝素结合于支架的 基体所承载的粘接性
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