用于治疗慢性粒细胞白血病的柠檬苦素化合物及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从白鲜的干燥根皮中分离得到的一种具有治 疗慢性粒细胞白血病作用的柠檬苦素类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 白鲜（DictamnusdasycarpusTurcz·)隶属于芸香科（Rutaceae)白鲜属 (DictamnusL.)，为多年生的草本植物，植物体具有浓烈的特殊香味，主要分布于欧洲和亚 洲部分地区。该属全世界约5种，中国植物志记载1种。据历代本草及《中国药典》2010版一部 收载记录，中药白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜的干燥根皮，是中国常用中药，又名北鲜 皮、野花椒根皮、臭根皮等。现代药理学研究表明，中药白鲜皮具有清热燥湿、祛风止痒以及 解毒等功效，用以治疗黄水淋滴、湿疼、风湿热瘦、挤癖疮癒、黄追尿赤等症，从而引起广泛 关注。
[0003]目前，从白鲜根皮以及地上部分已分离鉴定出多种化学成分，包括挥发油类、生物 碱类、柠檬苦素类、多糖化合物以及香豆素、黄酮类、留体类等成分。白鲜皮中所含的生物碱 为呋喃喹啉类生物碱，主要有白鲜碱、茵芋碱、萌芦巴碱、胆碱、γ-崖椒碱、异斑佛林草碱、 7，8-dimethoxymyrtopsine、〇-ethylnor-γ-fagarine、platydesmine、〇-ethylnor dictamine、0_ethylnorskimmianin、7，8-dimethoxyplatydesmine等，其中白鲜喊为白鲜 皮的指标成分之一。此外，柠檬苦素类化合物是白鲜属植物中分布最为广泛的一类化合物， 为白鲜皮中一大类重要活性成分。
[0004]白鲜植物体挥发油类物质如倍半萜类化合物等具有抗肿瘤增生及细胞毒性活性， 其对6种肿瘤细胞株的生长具有明显的抑制作用，如人类乳房肿瘤细胞株(MCF-7，ZR-75-30 和MDA-MB-435S)、人类肝脏癌细胞株（Bel-7402和HepG2)以及人类肾上腺细胞细胞株 (ACHN)。另外，白鲜皮中挥发油类还具有强烈的抑制耐甲氧西林金葡菌及金黄色葡萄球菌 ATCC25923的活性。生物碱具有强心、抗炎、收缩血管平滑肌、抗病原微生物等作用。其中， 白鲜碱为其重要活性成分，具有抗菌、抗病毒和皮肤湿疹、皮肤瘙痒和体外抗癌活性等多种 生物活性。白鲜皮中的柠檬苦素类化合物涔酮具有体外抗癌活性，并可作为一种新型的肝 病治疗药物，具有良好的保肝降酶和抑制肝纤维化等作用。药理实验表明，白鲜皮粗多糖能 明显增加正常小鼠胸腺和脾脏的重量，提高网状内皮系统吞噬功能，具有抗疲劳、耐缺氧、 提高机体抗应激能力，能显著促进小鼠胆汁分泌，加速肝内毒物排泄，从而保护肝脏。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种从白鲜的干燥根皮中分离得到的一种具有治疗慢性粒 细胞白血病作用的柠檬苦素类化合物及其制备方法。
[0006]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007]具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将白鲜的干燥根皮粉碎，用 75~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和 的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸 膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、40 :1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012]药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0013]所述的化合物(I)在制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018]图1为化合物(I)结构式；
[0019 ]图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]制备方法：（a)白鲜的干燥根皮（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取(25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇（3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（398g)和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（163g); (c) 步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(8个柱 体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(49g)用200-300目正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为20:1(8个柱体积）、12:1(10个柱体积)和5:1(5个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(25g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 0DS-C18分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (44mg)。
[0024] 结构确证：白色粉末;HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z741.3114，结合核磁特征可得分 子式为C37H50OW，不饱和度为13。核磁共振氢谱数据δΗ(ppm，DMS〇-d6，400MHz):Η-1 (4.68，br， s)，H-2(2.13，m)，H-2(2.17，m)，H-3(4.82，dd，J= 3.0,2.4)，H-5(2.35，d，J=12.8)，H-6 (3.99，dd，J=12.8,3.2)，H-7(4.96，d，J= 3.2)，H-9(2.85，d，J= 3.4)，H-ll(5.03，ddd，J= 9.5,3.8,3.4)，H-12(2.03，dd，J=15.1，9.5)，H-12(1.39，dd，J=15.1，3·8)，Η-15(4·42， s)，H-17(5.46，s)，H-18(1.17，s)，H-19(1.13，s)，H-21(7.28，br，s)，H-22(6.21，br，s)，H-23(7.30，dd，J=1.7，1.7)，H-28(3.24，br，d，J= 7.8)，H-28(3.43，d，J= 7.8)，H-29(1.09， s)，H-30(1.22，s)，H-2'（2.17，m)，H-3'（1.41，m)，H-3'（1.67，m)，H-4'（0.88，t，J=7.4)，H-5'（1.06，d，J= 7.1)，l-0Ac(2.01，s)，7-0Ac(2.02，s)，ll-0Ac(1.99，s);核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，DMS0-d6，125MHz):70.8(CH，1-C)，27.2(CH2,2-C)，72.6(CH，3-C)，41.8(C，4-C)， 41.3(CH，5-C)，71.7(CH，6-C)，73.2(CH，7-C)，43.7(C，8-C)，39.0(CH，9-C)，39.5(C，10-C)， 65.8(CH，11-C)，37.9(CH2，12-C)，37.2(C，13-C)，87.7(C，14-C)，69.8(CH，15-C)，166.1(C， 16-C)，77.8(CH，17-C)，18.4(CH3，18-C)，17.1(CH3，19-C)，119.7(C，20-C)，140.8(CH，2卜 C)，109.2(CH，22-C)，142.8(CH，23-C)，77.8(CH2,28-C)，19.4(CH3,29-C)，19.8(CH3,30-C)， 175.1(C，1，-C)，40.9(CH，2，-C)，26.2(CH2,3，-C)，11.3(CH3,4，-C)，16.9(CH3,5，-C)，168.7 (C，1-0Ac)，21.1(CH3，1-0Ac)，169.3(C，7-0Ac)，20.3(CH3,7-0Ac)，168.9(C，11-0Ac)，21.2 (CH3，11-0Ac);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有羟基（3435CHT1)和羰基 (1743和1712cm-3基团。匪R数据表明该化合物含有一个β-取代呋喃环[SH7.28(br，s，H- 21)，6.21(1^，8，!1-22)和7.30((1(1，了=1.7，1.7抱，!1-23);3(：142.8，140.8，119.7，109.2]，四 个甲基 0!11.22，1.17，1.13，1.〇9)，一个2-甲基丁酰氧基（3(：175.1，4〇.9,26.2，16.9和 11.3)，三个乙酰氧基0!12.〇2,2.〇1和1.99)和内酯羰基0(：166.1)。圓8(：数据显示该化合物 还含有6,28-醚桥。!1\?(：谱中，!1-10!14.68，1^，8)，!1-7(5!14.96，(1，1 = 3.2取）和!1-11(3 !15.03，(1(1(1，1 = 9.5,3.8,3.4他）与相应的酯羰基碳6(：168.7，169.3和168.9的相关性说明三 个乙酰氧基分别与C-l，C-7和C-l1相连。此外，HMBC谱中H-3 (δΗ4.82，dd，J= 3.