算余料。试验组添加安酶乐需另加30元/吨成本；
[0066] 2、对照组饲料单价：（5*6. 2+8*4. 2+14. 35*3. 7) /27. 35 = 4. 30 元/kg;
[0067] 3、试验组饲料单价：（5*6. 2+9. 5*4. 2+16. 11*3. 7)/30. 61+0. 03 = 4. 29 元 /kg。
[0068] 由表3可知，扣除饲料成本，试验组每头仔猪因增重增加的毛利为109. 28元，对 照组为88. 65元，试验组每头仔猪比对照组净利增加20. 63元，提高23. 27%。可以得出结 论，在保育仔猪日粮中添加适当比例的低温淀粉酶，能有效提高保育仔猪的生产性能，进而 直接提高猪场的经济效益；另外，试验组的皮色和毛色明显皮红毛亮，好于对照组。
[0069] 选取实施例4的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶，酶活性为3000U/g。选取28日龄 胎次、体重接近的健康仔猪200头（公母各半），采用随机分组方式分成试验组和对照组，每 组4个重复，每个重复25头仔猪，试验期20天。试验期间，试验组日粮在对照组日粮基础 上添加低温淀粉酶500克/吨。试验结果如下：
[0070] 仔猪生产性能分析见表4
[0071] 表4饲养1~20日龄试验期间生产性能分析表
[0073] 仔猪试验期间耗料情况见表5
[0074] 表5仔猪试验期间耗料情况表
[0075]
[0076] 表4、表5结果表明：
[0077] 仔猪增重方面：按照试验设计饲喂10天和20天后，试验组和对照组各栏仔猪体 重均有所增加。试验组的起始均重低于对照组，但是饲喂10天和20天后称重，试验组的 平均体重均高于对照组。整个试验期间试验组仔猪的平均净增重比对照组高590g，提高了 9. 91%〇
[0078] 日增重方面：试验组饲养1~10日龄平均日增重比对照组高28g，提高了 8. 86%; 1~20天日龄的平均日增重比对照组高30g，提高了 10. 07%。
[0079] 仔猪耗料方面：试验期间两组的总耗料相差不大，试验组略高于对照组，但是试验 组的料肉比比对照组低0. 14,降低了 8. 75%。
[0080] 仔猪健康方面：试验期间试验组和对照组仔猪均未出现明显的呼吸道和消化道疾 病，两组仔猪死亡率均为0。
[0081] 投入与产出经济效益分析见表6。
[0082] 表6仔猪投入与产出经济效益分析表
[0083]
[0084] 由表6分析可知，饲喂低温淀粉酶20天试验组每头比对照组多盈利7. 83元，经济 效益十分可观。另外，从外观来看，试验组的皮色和毛色明显好于对照组。
[0085] 选取实施例3的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶，酶活性为3500U/g。选取1日龄健 康的AA肉鸡300羽，随机分成2个处理组，每个处理组3个重复，每个重复50只。试验分 为对照组（基础日粮）和试验组（基础日粮+400克/吨低温淀粉酶），试验期42天。
[0086] 低温淀粉酶对AA肉鸡生产性能的影响见表7。
[0087] 表7饲养1~42日龄试验期间各项生产性能指标表
[0088]
[0089] 由表7中试验结果可知：
[0090] 平均净增重方面：按照试验设计饲喂1~21天，试验组比对照组每只鸡平均净增 重高30. 99g，提高了 4. 29% ;饲喂22~42天试验组比对照组平均净增重高75. 8g，提高了 4. 89%。整个试验期间试验组比对照组平均净增重高106. 79g，提高了 4. 86%。
[0091] 平均日增重方面：试验组饲喂1~21天比对照组高1. 48g，提高了 4. 29% ;饲喂 22~42天试验组比对照组平均日增重高3. 61g，提高了 5. 14%。整个试验期间试验组比对 照组平均日增重高2. 54g，提高了 4. 86%。
[0092] 耗料及料肉比方面：试验期间两组的总耗料相差不大试验组略微高于对照组。但 是试验组饲喂1~21天料肉比比对照组低0. 05,降低了 3. 38%;饲喂22~42天试验组比 对照组平均料肉比低0. 1，降低了 4. 83%。整个试验期间试验组比对照组料肉比低0. 08,降 低了 4. 28%。
[0093] 以上实施例的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法采用固体发酵工艺研制 和生产，其低温淀粉酶最适作用温度条件较低，在动物体温（38-42Γ)的条件下具有很强 的活性，发挥最佳活性的pH值（4-6)范围和畜禽胃肠道pH值相吻合，具有优越的过胃性 能，能抵抗胃酸和胃蛋白酶的破坏，耐热性能良好，能抵抗饲料制粒过程中的高温，储存稳 定性好，是一种无毒副作用、无污染、无残留、安全高效的绿色饲料添加剂。
[0094] 应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
【主权项】
1. 一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 一级斜面培养：将低温淀粉酶产酶菌种接种至斜面培养基上，25°C~35°C培养4~ 8d，得到一级斜面种子孢子； 2) 二级培养：将步骤1)中的一级斜面种子孢子接种于液体培养基中，装液量为50~ 100mL/500mL，25°C~35°C、160~300rpm/min条件下培养48~55h得到二级种子液； 3) 三级扩大培养：将步骤2)中得到的二级种子液体积百分比0.5%~10%接种于发 酵罐内，在液体培养基中25°C~45°C、160~300rpm/min条件下培养20~36h，得到三级 种子液； 4) 固体发酵：将步骤3)的三级种子液的液体培养基按1%~10%的重量比接入固体 发酵培养基中，培养基含水量为49%~65%，pH为5. 0~7. 0,曲房相对湿度保持在95% 以上，料温为30°C~45°C，采用固体发酵48~72h; 或者 Γ) 一级斜面培养：将低温淀粉酶产酶菌种接种至斜面培养基上，25°C~35°C培养4~ 8d，得到一级斜面种子孢子； 2'）二级斜面培养：将步骤Γ)中的一级斜面种子孢子接种于内含斜面培养基的二级 茄形培养瓶斜面，25°C~35°C培养4~8d得到二级斜面孢子； 3'）固体发酵：将步骤2'）的二级斜面孢子制备为孢子悬液，按1个茄形培养瓶孢子 悬液接种于l〇〇kg固体发酵培养基中，培养基含水量为50%~65%，pH为5. 0~7. 0,曲房 相对湿度保持在95 %以上，料温为30°C~45°C，采用固体发酵48~72h。2. 根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤1)或Γ)或2'）中所述斜面培养基为按下述比例配制的混合液：硝酸钠3. 0~5. 0g/ L、磷酸氢二钾0. 5~1. 5g/L、硫酸镁0. 5~5g/L、氯化钾1. 0~10g/L、硫酸亚铁1~5g/ L、鹿糖10~30g/L、琼脂15g。3. 根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤2)或3)中所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：玉米淀粉5~40g/L、豆柏粉 5~20g/L、葡萄糖3~12g/L、胰蛋白胨10~25g/L、牛肉膏5~10g/L、磷酸二氢钾1~ 5g/L、硫酸镁1~5g/L、碳酸|丐1~5g/L。4. 根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤2)或3)中所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液：麦芽糊精5~20g/L、玉米淀 粉5~40g/L、豆柏粉5~20g/L、葡萄糖3~12g/L、胰蛋白胨10~25g/L、牛肉膏5~10g/ L、磷酸二氢钾1~5g/L、硫酸镁1~5g/L、碳酸1? 1~5g/L。5. 根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤4)中所述固体发酵培养基为按下述质量比配制：麸皮30%~40%，玉米粉1 %~5%，豆 柏粉30%~40%，葡萄糖0. 1%~2%，氯化钠2%~5%，磷酸氢二钾0.2%~1%，硫酸锰 0· 1%~0· 5%，碳酸钙 0· 5%~2%，氯化铵 0· 5%~1%，ρΗ5· 0 ~7. 0。6. 根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤4)中所述固体发酵培养基为按下述质量比配制：麸皮55 %~70%，豆柏10 %~30%， 玉米粉1%~5%，麦芽糊精1%~5%，碳酸钙1%~5%，蔗糖0. 1%~1%，乳糖0.5%~ 1. 5%，葡萄糖 0· 1 %~1 %，酵母膏 0· 1 %~1 %，ρΗ5· 0 ~7. 0。7.根据权利要求1所述的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，其特征在于：步 骤3'）中所述固体发酵培养基为按下述质量比配制：麸皮55%~70%，豆柏10%~30%， 玉米粉1 %~5%，蔗糖0. 1 %~1%，乳糖0.5%~1.5%，葡萄糖0. 1 %~1%，酵母膏 0. 1%~1%，pH5. 0 ~7. 0。
【专利摘要】本发明提供了一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法，包括如下步骤：1)一级斜面培养2)二级培养3)三级扩大培养4)固体发酵或1’)一级斜面培养2’)二级斜面培养3’)固体发酵。本发明的一种畜禽饲料专用低温淀粉酶的制备方法采用固体发酵工艺研制和生产，其最适作用温度条件较低，在动物体温(38-42℃)的条件下具有很强的活性，发挥最佳活性的pH值(4-6)范围和畜禽胃肠道pH值相吻合，具有优越的过胃性能，能抵抗胃酸和胃蛋白酶的破坏，耐热性能良好，能抵抗饲料制粒过程中的高温，储存稳定性好，是一种高效内切型淀粉酶，且是一种无毒副作用、无污染、无残留、安全高效的绿色饲料添加剂。
【IPC分类】A23K20/189, C12N9/26
【公开号】CN105420213
【申请号】CN201510922478
【发明人】王云龙, 吴勃, 高研
【申请人】杭州保安康生物技术有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月11日