实例中，描述了如何制造和使用本文所公开的具体18F-标记试剂之一 ，18F-DEG-VS。展示了 18F-DEG-VS与生物配体神经降压素(NT)中的游离巯基的偶联。因为越 来越多的证据表明神经降压素受体(NTR)在癌症生长和存活中发挥重要作用（16，17)，发明 人使用了巯基化的NT肽以显示出 18F-DEG-VS作为肽标记试剂的潜力。由此产生的18F标记的 NT衍生物进一步在带有NTR1阳性肿瘤的啮齿动物模型中通过PET评估。
[0151] 1.原料和方法
[0152] 一般事项
[0153] 所有可商购的化学试剂购自Aldrich并且不经进一步纯化而使用。cRGDyC和 cRGDyK 从 Pept ides International Inc (Louis vi lie，KY)购买 疏基化神经降压素类似物 由City of Hope肽合成中心使用标准FM0C化学合成。无载体添加的18F-氟化物是使用 Siemens RDS-112负离子回旋加速器通过以ΙΙ-MeV质子轰击经同位素富集的[180]水靶 (95%富集，18〇11；^8,6〇1(1611，(1))经 180(卩，11)18卩反应制备。
[0154] 所有的HPLC条件都是梯度洗脱。HPLC方法1: Phenomenex?C18柱(250 X4.6mm，5微 米）；lmL/分钟流速;且洗脱液梯度为：0至2分钟，95%溶剂A[0.1 %三氟乙酸（TFA)的水溶 液]和5 %溶剂B[0.1 % TFA的乙腈(MeCN)溶液];2至7分钟，95 %~85 %溶剂A和5 %~15 %溶 剂B; 7至2 7分钟，8 5 %~7 0 %溶剂A和15 %~3 0 %溶剂B。HPLC方法2 : Phenomenex?C18柱 (250 X 4.6mm，5微米）；lmL/分钟流速;且洗脱液梯度为:0至2分钟，95 %溶剂A和5 %溶剂B; 2 至 2 2 分钟，9 5 % ~5 % 溶剂 A 和 5 % ~9 5 % 溶剂 B。HP L C方法 3 : Phenomenex?C 18 柱（2 5 0 X 4.6mm，5微米）；lmL/分钟流速;采用逐步梯度洗脱:0至2分钟，95 %溶剂A和5%溶剂B; 2至32 分钟，95 %~65 %溶剂A和5 %~35 %溶剂B。所有1HNMR和13C NMR光谱都于室温在400MHz记 录(Varian)。光谱在直径5mm管中以⑶C13、D20溶液获得，且以ppm计的化学位移是相对于 ΟΧη3(δ H 7.26ppm，或δ C 77.2ppm)或?20(δ H 4.65ppm)的残基信号来引述。在1H NMR 谱中的多重性被描述为:s =单峰，d =双峰，t =三重峰，q=四重峰，m =多重峰，b =宽峰。所 有产物在Thermo Electron LTQ-FT质谱仪上进行质谱表征。
[0155] 化学合成
[0156] 2-(2-羟基乙氧基）乙基4-硝基苯磺酸酯（化合物1)的合成：将4-硝基苯磺酰氯 (12 · 5g，56 · 6mmol)加入到二乙二醇（5g，47mmol)和三乙胺（9mL，66mmol)的二氯甲烧 (150mL)溶液中（图1A)。反应混合物在室温搅拌过夜，然后用水和盐水洗涤。将溶剂蒸发后， 残余物通过柱色谱（二氯甲烷/乙醚，9:1)纯化，得到无色固体（1)(产率:25%~30%)。咕_ NMR(CDC13) ：δ 8.42(d，2H)，8.15(d，2H)，4.34(t，2H)，3.75(t，2H)，3.70(t，2H)，5.56(t， 2H)。 130匪R(CDC13) :150.5(s)，141.9(s)，129.3(d)，124.5(d)，72.6(t)，70.3(t)，68· 5 (t)，61.7(t)〇
[0157] 2-(2-(2-(乙烯基磺酰基）乙氧基）乙氧基）乙基4-硝基苯磺酸酯（化合物2)的合 成：将t-Bu0K(50yL，50%甲醇溶液）加入到（1)(1克，3.4mmol)和二乙烯基砜（2.2mL， 20mmol)的溶液中。反应混合物在室温搅拌4小时。将反应混合物通过柱色谱(二氯甲烷/乙 醚，9:1)纯化，得到无色固体(2)(产率:70%~80%)</H-NMR(CDCl 3)j8.41(d，2H)，8.13(d， 2H)，6.78(d，lH)，6.41(d，lH)，6.11(d，lH)，4.29(t，2H)，3.88(t，2H)，3.72(t，2H)，3.58(s， 4H)，3.24(t，2H)。 130匪R(CDC13) :150.8(s)，141.8(s)，137.9(d)，129.3(d)，129.0(t)， 124.5(d)，70.4(t)，68.5(t)，64.6(t)，54.9(t)。
[0158] (2-(2-(2-氟乙氧基）乙氧基）乙基磺酰基）乙烷(19F-DEG_VS，化合物3)的合成:将 30yL TBAF(1M TBAF的THF溶液)加入到2-(2-(2-(乙烯基磺酰基）乙氧基）乙氧基）乙基4-硝 基苯磺酸酯（12mg，41.2μ mo 1)的DMS0(50yL)溶液中，在78°C反应过夜。将反应混合物通 过(：18柱在冊1^(：上纯化，得到2.811^(3)(产率：41.3%)，为微黄色液体。该产物用1116^11〇 LTQ-FT 质谱仪表征。（m/z 227.07[MH] +，C8Hi5F〇4S，计算[MH]+227.07)<aH-匪 R(D20)J 6.79(q，lH)，6.32(d，lH)，6.20(d，lH)，4.57(t，lH)，4.45(t，lH)，3.84(t，2H)，3.72(t，lH)， 3.61(m，5H)，3.42(t，2H)。
[0159] 19F-DEG-VS-cRGDyC的合成：将cRGDyC(lmg(1.68y mol)，在100yL H2O中）和19F- DEG-VS(500y g(2.2 μπιο?)，在5μ L MeCN和45μ L H20中）加入到900μ L磷酸盐缓冲 液(pH7.0)中。将反应混合物在室温温育30分钟，通过HPLC纯化。HPLC条件：Phenomenex? Cl 8柱;流速设定为lmL/分钟;洗脱液梯度为:0至2分钟，95 %溶剂A [ 0.1 %三氟乙酸(TFA)的 水溶液]和5 %溶剂B[0 · 1 %TFA的乙腈(MeCN)溶液];2至7分钟，95 %~85 %溶剂A和5 %~ 15 %溶剂B; 7至27分钟，85 %~70 %溶剂A和15 %~30 %溶剂B。19F-DEG-VS-cRGDyC的保留时 间为17.2分钟。最终产物冻干后为白色固体。该产物用Thermo LTQ FT质谱仪表征。（m/z 821 · 29[ΜΗ] +，C32H49FN8O12S2，计算[ΜΗ] +821 · 29) 〇
[0160] 19F-DEG-VS-cRGDyK的合成：将cRGDyK( lmg( 1 · 61ymol)，在100yLH2〇中）和 19F-DEG- VS(500y g(2.2y mol)，在 5yLMeCN 和 45μ LH2O 中）加入到 900yL 磷酸盐缓冲液(ρΗ9·0) 中。将反应混合物在室温温育过夜，通过HPLC纯化。HPLC条件与cRGDyK纯化相同。19F-DEG-VS-cRGDyK的保留时间为13 · 1分钟。最终产物冻干后为白色固体。该产物用Thermo LTQ FT 质谱仪表征。(m/z 846.38[ΜΗ] +，C32H49FN8O12S2，计算[ΜΗ] +846.38)。
[0161] 19f-deg-vs-神经降压素和19F-DEG-VS-(Ac)_神经降压素的合成:神经降压素类似 物（NT，Cys-pipGly-Pr〇-pipAmGly-Arg-Pr〇-Ty;r-tBuGly-Leu-〇H，300yg(0·25μ mol)，在 30yL H20中）或（Ac)-NT和 19F-DEG-VS(500y g，2.2ymol，5yL MeCN和45yL H2O)加入到900μ L 0.1M硼酸盐缓冲液(pH8.5)。将反应混合物在室温温育30分钟，通过方法1使用HPLC纯化 ^F-DEG-VS-NT和( 19F-DEG-VS)2-NT的保留时间分别为20.08分钟和23.09分钟。最终产物冻 干后为白色固体。该最终产物通过质谱表征（ 19F-DEG-VS-NT:m/Z 1409.75[MH) +， C63H1Q5FN16O15S2,计算[ΜΗ] + 1，409· 74; (19F-DEG-VS)2_NT:m/z 1，635 · 82[MH] +， C7iH12〇F2N16〇19S3,计算[MH]+ l，635·80)。19F-DEG-VS-(Ac)-NT在放射HPLC上的保留时间为 28·18分钟。最终产物通过质谱确认（ 19F-DEG-VS-(Ac)-NT:m/zl451·76[MH] +， C65H1Q8FN16O16S2,计算[MH] + 1451 · 75)。
[0162] 19F-FBEM-c(RGDyC)的合成:FBEM如前所述合成（12)。将FBEM(420yg，1 · 6μ mol，50 4 1^出0)和(：（1?07〇(50(^8,0.84 111〇1，5(^1^!120)加入到20(^1^?85(口!17.5)中。将反应 混合物在室温温育30分钟，用方法3通过HPLC纯化。 19F-FBEM-c(RGDyC)的保留时间为18.2分 钟。最终产物通过质谱确认(19F-FBEM-c(RGDyC):m/z 857.30 [MH]+，CwiteFNioOnS，计算[MH ]+857.31)。
[0163] 19F-FBEM-NT的合成：将FBEM(130y g，0 · 5μπιο1，50yL H2O)和NT(300yg，0 · 25μ mol，50yL Η20)加入到200yL roS(pH7.5)中。将反应混合物在室温温育30分钟，用方法3通 过HPLC纯化。19F-FBEM-NT的保留时间为18.9分钟。最终产物通过质谱确认( 19F-FBEM-NT: m/ z 1445.74[MH] +，C68Hi〇iFNi8〇i4S，计算[MH]+ 1445.76)。
[0164] 放射化学
[0165] 18F- (2- (2- (2-氟乙氧基）乙氧基）乙基磺酰基）乙烷(18F-DEG-VS，18F-3)的合成: 18F 氟化物(200mCi)放置于S印-Pak QMA盒中。用四丁基碳酸氢铵(TBAB)溶液(400yL H20)将18F 氟化物从QMA盒来洗脱至干燥V型管中。将所得溶液共沸干燥，随后在90°C蒸发MeCN。将(2) 的溶液（l〇mg，在50yL无水DMS0中）加入到反应器中，并在80°C加热10至15分钟。加入乙酸 (5%，800yL)以淬灭反应。然后通过HPLC纯化粗混合物(Phenomenex?C18柱：lmL/分钟，洗脱 剂梯度:〇至2分钟，95 %溶剂A和5 %溶剂B; 2至7分钟，95 %~85 %溶剂A和5 %~15 %溶剂B; 7至27分钟，85%~65%溶剂A和15%~35%溶剂B) ^F-DEG-VS的保留时间为12.2分钟。将 收集的18F-DEG-VS用Na0H(0.1mol/L)中和。18F-DEG-VS的分离放射化学产率基于HPLC为大 于90 % (未经衰变校正）。
[0166] 18F-DEG-VS-cRGDyC的合成：18F-DEG-VS( 100yL，lmCi)和cRGDyC( 100yg)加入到30μ L硼酸盐缓冲液(pH 8.5)，并且将反应混合物在室温温育5至10分钟。加入乙酸(5%，600yL) 以淬灭该反应，并通过HPLC纯化产物(Phenomenex?iC18柱：lmL/分钟，洗脱剂梯度:0至2分 钟，95 %溶剂A和5 %溶剂B; 2至22分钟，95 %~5 %溶剂A和5 %~95 %溶剂B)。18F-DEG-VS-cRGDyC的保留时间为21.5分钟。
[0167] 18F-DEG-VS-cRGDyK的合成：18F-DEG-VS(100μL，lmCi)和100μL硼酸盐缓冲液 (PH9.0)加入到cRGDyK(100y g)中，并且将反应混合物在室温温育30分钟。加入乙酸(5%， 600μ L)以淬灭该反应。产物通过HPLC纯化。
[0168] 选择性试验:cRGDyK 和 cRGDyC。将 18F-DEG-VS(100yL，lmCi)和 50μ U1酸盐缓冲液 (ΡΗ8.5)加入到cRGDyC(20y g)和cRGDyK(20y g)中。将反应混合物在室温温育30分钟。加 入乙酸(5%，600μ L)以淬灭该反应，且产物通过HPLC纯化。
[0169] 18F-DEG-VS-NT 和 18F-DEG-VS-(Ac)-NT 的合成：将 18F-DEG-VS(100y L，lmCi)和 30μ 〇1酸盐缓冲液化118.5)加入到神经降压素（10(^8,0.084以111〇1)或以(3)-阶中，将反应混 合物在室温温育5至10分钟。加入乙酸(5%，600yL)以淬灭该反应，且产物使用方法1通过放 射性HPLC纯化。 18F-DEG-VS-NT的保留时间为25.6分钟，没有观察到（18F-DEG-VS)2-ΝΤ。为了 研究 18F-DEG-VS-NT的稳定性，最终产物与1 X roS在37 °C温育5小时。然后将溶液的等分试样 通过放射-HPLC进行分析，以确定放射化学纯度。18F-DEG-VS-(A C)-NT的保留时间为28.4分 钟。
[0170] 18F-FBEM-c(RGDyC)的合成：18F-FBEM(100yL，lmCi)和30yL PBS(pH 7.5)加入到装 有100yg c(RGDyC)(0.16 μπιο?)的小瓶中。将反应混合物在室温温育15分钟。该反应通过 乙酸溶液(5 %，600yL)淬灭，产物使用方法3通过放射性HPLC纯化。18F-FBEM-c (RGDyC)的保 留时间为18.4分钟。
[0171] 18F-FBEM-NT的合成：将18F-FBEM(100μL，lmCi)和30μLPBS(pH7·5)加入到装有 l〇〇yg神经降压素肽(0.084 μ mol)的小瓶中。将反应混合物在室温温育15分钟。该反应 通过乙酸溶液(5 %，600μ L)淬灭，产物使用方法3通过放射性HPLC纯化。18F-FBEM-NT的保 留时间为19.0分钟。
[0172] 细胞
[0173] 人结肠腺癌细胞HT2