一种基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光生物传感器及其制法和应用的制作方法

文档序号:11107584阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光生物传感器,其特征是:在金电极表面修饰磁性纳米金棒后连接细胞适体,然后组装纳米金-DNA引发链,最后固定CdSe/ZnS量子点纳米簇电化学发光信号探针,构建电化学发光生物传感器。

2.一种制备权利要求1所述的CdSe/ZnS量子点纳米簇电化学发光探针的方法,其特征是它由下列步骤组成:

步骤1.NaHSe的制备:0.0950g的NaBH4加入10mL的离心管中,在离心管中加入6mL的去离子水,加入磁子搅拌溶解,通氮气排出多余的氧气,称取0.0947g的Se粉快速加入体系中,在常温下搅拌至无色透明(即Se粉完全溶解)

步骤2.CdSe量子点的制备:将0.5709g的CdCl2·2.5H2O加入100mL的三口烧瓶中,50.0mL的去离子水溶解,通氮气排出多余的氧气,移取400μL的巯基乙酸加到三口烧瓶中,用1M的NaOH调pH至10-11,溶液变得澄清透明,然后把制得的NaHSe溶液迅速加入到三口烧瓶中,加热沸腾30-40min得淡黄色澄清溶液。

步骤3.CdSe@ZnS量子点的制备:将制得的CdSe量子点溶液在水浴中保持45℃,分别在5mL的去离子水中溶解0.21g NaS·9H2O和0.25gZnSO4,然后将两溶液交替加入到CdSe量子点中,反应30min,冷却至室温,即得到CdSe@ZnS量子点。所得量子点于棕色瓶中避光保存备用。

步骤4.CdSe/ZnS量子点-发夹DNA信号探针的组装(溶液b):按照使用说明,将带有氨基的发夹DNA H1和H2溶解,再稀释至浓度为1.0×10-5M,以备实验使用。取100μL的CdSe@ZnS-COOH的量子点加入到1.5mL的离心管中,加入10μL的0.1mol/L的EDC和10μL的0.025mol/L的NHS溶液,室温下活化反应30min。活化后离心管中加入100μL的H1和H2,室温下反应16h后10000rpm下离心重新分散至100μL溶液,记为溶液b,保存备用。

3.一种采用权利要求1所述的基于CdSe/ZnS量子点纳米簇信号探针的电化学发光生物传感器,以及采用该生物传感器检测癌细胞的分析方法。其特征是它由下列步骤组成:

步骤1.纳米金-DNA引发链的组装(溶液a):取1mL的金胶溶液,按一定的比例加入P1和S1,在37℃下震荡温育16h,反应完全后在10000rpm下离心30min后重新分散至100μL,记为溶液a,4℃下保存备用。

步骤2.将带有适体DNA的电极浸入到溶液a中,用铝箔纸封好后,在37℃的条件下震荡温育1~2h后用pH=7.4的PBS缓冲溶液冲洗未反应的溶液,然后将此标记的电极浸入到溶液b中,同样用铝箔纸封好,在37℃的条件下震荡温育1~2h,取回电极用pH=7.4的PBS缓冲溶液冲洗未反应的溶液,制成检测细胞的ECL的生物传感器。

步骤3.癌细胞的电化学发光(ECL)检测。将ECL传感器分别与100μL含有不同浓度(例如1000个细胞每毫升)细胞的PBS溶液震荡温浴45~60分钟。

将步骤3处理后的基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光传感器清洗,在含有0.05M K2S2O8和0.1M KCl的0.1M PBS(pH 7.4)缓冲液中,进行电化学发光的测试,发光强度与待测样品(癌细胞)的浓度成线性关系。

4.根据权利要求3所述的癌细胞检测方法,其特征是:所述的电化学发光测试是以修饰好的金电极(基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光传感器)为工作电极、Pt电极为对电极、甘汞电极为参比电极的三电极体系,用MPI-A型电致化学发光仪,在0到-1.5V进行循环伏安扫描,光电倍增管高压设为500~700V。

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