一种纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒的制作方法

本发明涉及临床体外检测
技术领域：
，具体涉及一种纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒。
背景技术：
：纤维蛋白降解产物是纤维蛋白原和纤维蛋白被血浆素分解后产生的降解产物(fdp)，主要反映纤维蛋白的溶解功能。fdp与其他指标同时检测，可鉴别原发或继发性纤维蛋白溶解亢进。临床上fdp作为多种血栓性疾病的参考指标，并被列为弥散性血管内凝血实验室诊断的常规指标之一。血浆纤维蛋白降解产物检测是定量测定血清中fdp的含量，检测结果以每升血浆中fdp的毫克数(mg/l)表示，fdp含量的高低可反映体内纤溶活性的强度。fdp能抑制纤维蛋白形成，有抗凝血酶作用，抑制血小板粘附聚集和释放。目前临床上对fdp检测的方法主要有乳胶免疫比浊法、酶联免疫吸附法、乙醇胶试验法和乳胶凝集法等，其中，胶乳免疫比浊法检测fdp是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法，由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广，但是现有技术的乳胶免疫比浊法在检测fdp时显示出的稳定性较差。技术实现要素：本发明提供一种在保证检测准确度、线性相关性和分析灵敏度的基础上，能够进一步提高稳定性的纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒。为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：本发明提供一种纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒，包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：所述试剂r1的成分和含量如下：缓冲液30～100mmol/l表面活性剂11～5ml/l；所述试剂r2的成分和含量如下：进一步的，所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，ph值为8.0。进一步的，所述甜菜碱为椰油酰胺丙基甜菜碱。进一步的，所述表面活性剂1和表面活性剂2均为proclin300、tritonx-100、聚氧乙烯月桂醚中的一种或多种组合。进一步的，所述抗人fdp单克隆抗体胶乳颗粒包括鼠抗人fdp单克隆抗体、兔抗人fdp单克隆抗体、羊抗人fdp单克隆抗体中的一种或多种。进一步的，所述试剂r1的成分和含量如下：缓冲液50mmol/l表面活性剂13ml/l；所述试剂r2的成分和含量如下：进一步的，所述试剂r1与试剂r2的体积比为1:1。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明的纤维蛋白及纤维蛋白原分解产物检测试剂盒在试剂r2中添加由bsa、脂肪酸山梨坦、甜菜碱、聚乙烯吡咯烷酮四种成分组成的稳定剂，bsa能够对胶乳颗粒表面交联的抗体起到很好的胶体保护稳定作用，脂肪酸山梨坦和甜菜碱吸附在胶乳颗粒的表面，用于降低胶乳颗粒表面张力，使胶乳颗粒不易聚集，有效地提高胶乳颗粒在溶液中稳定性，聚乙烯吡咯烷酮可以提高溶液的密度和粘度，使胶乳颗粒能够长期悬浮在溶液中不会沉降而起到很好的稳定作用。本发明通过使用上述四种成分组成的稳定剂，在确保检测的准确度、线性相关性和分析灵敏度的基础上，进一步提高了试剂盒的稳定性，有利于该试剂盒在市场中进一步的推广。附图说明图1为实施例1的试剂盒与对比例1的试剂盒的相关性曲线图；图2为实施例2的试剂盒与对比例1的试剂盒的相关性曲线图；图3为实施例3的试剂盒与对比例1的试剂盒的相关性曲线图；图4为本发明的试剂盒在全自动生化分析仪上检测的操作方法。具体实施方式为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。实施例1：本发明的纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液50mmol/lproclin3003ml/l；试剂r2的成分和含量如下：检测方法：采用全自动生化分析仪(如日立7180全自动分析仪、olympusau640等)，操作如下所示：本发明所使用的校准品为北京九强生物公司生产的校准品。先加入3ul的生理盐水、样本或校准品和100ul的试剂r1孵育5min，记录吸光度值a1，之后再加入100ul的试剂r2孵育5min，记录吸光度值a2，最后计算△a。实施例2：本发明的纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液30mmol/lproclin3001ml/l；试剂r2的成分和含量如下：检测方法同实施例1的检测方法，校准品采用北京九强生物公司生产的校准品。实施例3：本发明的纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：缓冲液100mmol/ltritonx-1005ml/l；试剂r2的成分和含量如下：检测方法同实施例1的检测方法，校准品采用北京九强生物公司生产的校准品。对比例1：采用市场上常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的纤维蛋白及纤维蛋白原分解产物检测试剂盒。对比例2：纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液50mmol/lproclin3003ml/l；试剂r2的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液50mmol/l鼠抗人fdp单克隆抗体胶乳颗粒0.1％proclin3003ml/l。对比例3：纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液50mmol/lproclin3003ml/l；试剂r2的成分和含量如下：对比例4：纤维蛋白及纤维蛋白原降解产物检测试剂盒包括试剂r1、试剂r2和校准品，其中：试剂r1的成分和含量如下：tris-hcl缓冲液50mmol/lproclin3003ml/l；试剂r2的成分和含量如下：准确度试验：将实施例1-3作为实验组，对比例1的试剂盒作为对照组进行对比试验，对40个样本进行检测，检测结果如图1-3所示。通过图1-3的检测数据可知，实施例1-3的检测试剂盒与对比例1的检测试剂盒的线性相关系数r分别为0.9989、0.9988、0.9989，相关性大于0.99，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的纤维蛋白及纤维蛋白原分解产物检测试剂盒具有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，本发明的试剂盒依然保持较好的准确度。分析灵敏度试验：使用实施例1-3的试剂盒以及对比例1-4的试剂盒检测已知fdp浓度在8μg/ml的样本，记录吸光度变化率(δa/min)。检测结果如表1所示。表1各试剂盒分析灵敏度检测结果理论浓度(μg/ml)8实施例1检测结果δa/min0.0565实施例2检测结果δa/min0.0577实施例3检测结果δa/min0.0573对比例1检测结果δa/min0.0536通过检测数据可知，本发明试剂盒添加的稳定剂成分对其分析灵敏度不会造成影响，试剂盒依然保持较好的分析灵敏度。稳定性试验：在2～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测实施例1-3的试剂盒以及对比例1-4的试剂盒的稳定性。每种试剂盒每月选取同一样本测定三次，取平均值，与新鲜的对比例1试剂检测结果进行比对，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。表2稳定性试验结果实验结果显示，实施例1-3的检测试剂盒在2～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，对比例1-4试剂在2～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12个月稳定，在15个月时稳定性下降了近80％。由此可以说明，本发明通过在试剂r2中加入由bsa、脂肪酸山梨坦、椰油酰胺丙基甜菜碱、聚乙烯吡咯烷酮四种成分组成的稳定剂，有效的提高了试剂的稳定性。以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12