红松种仁多糖的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食物分析技术领域，具体涉及一种红松种仁多糖的检测方法。
【背景技术】
[0002]在我国，食用红松种仁的历史己有3000多年，自唐代以来红松种仁就成为人们喜爱的小食品，宋代更是把红松种仁视为延年益寿的“长生果”，它既被视为美味食物，又作食疗佳品，倍受医家、营养家的推崇。《本草纲目》一记载:“松子味甘，性温，无毒。主治:骨头节风湿，头眩，祛风湿，润五脏，充饥，逐风痹寒气，补体虚，滋润皮肤，久服轻身不老，另有润肺功能，治燥结咳嗽”。
[0003]随着追求天然食品浪潮的兴起，红松种仁相关产品开发逐渐成为食品和保健品开发中的一个新亮点，红松种仁中的碳水化合物总含量为2.2%。多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖昔键连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命的分子基础之一。“多糖生物学”是生命科学的新前沿，多糖的生物信息量比蛋白质和核算还要高出一个数量级以上。
[0004]研宄发现不同种植物所含多糖类化合物是一类免疫调节剂，它具有抑制肿瘤生长，激活免疫细胞，改善机体免疫功能等作用。对正常细胞无毒副作用。到目前为止，从植物中分离出来的多糖类化合物中以水溶性多糖最为重要。通过对免疫物质、生物膜以及多种生物活性物质在生物体内活动的研宄表明，糖类在生物体内的功能不仅仅是提供能量和参与结构组织，同时还具有多种多样的生物学功能，在生物生命活动中扮演重要的角色，参与细胞的各种活动，尤其是多糖的功能与应用近年来更是人们关注的一个热点，国内外的大量研宄证明，多糖具有多方面的生物活性与功能。
[0005]目前，对红松种仁多糖进行提取并优化提取工艺以及提取产物的含量测定的研宄还很少。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种红松种仁多糖的检测方法，该检测方法简单，所需样品量少，为进一步研宄红松种仁多糖的药效作用提供了一种实用有效的提取分析方法。
[0007]红松种仁多糖的检测方法，包括以下步骤:
步骤I，取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取；
步骤2，将步骤I所得提取液冷冻离心，所得离心上清纳滤浓缩；
步骤3，在步骤2所得浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤4，在步骤3所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，弃上清；
步骤5，在步骤4所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；步骤6，在步骤5所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖；
步骤7，将步骤6所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。
[0008]作为上述发明的进一步改进，步骤I中红松种仁的用量为20?60g，蒸馏水的用量为 10 ?50mLo
[0009]作为上述发明的进一步改进，步骤I中回流提取温度为70?90°C，时间为I?3h。
[0010]作为上述发明的进一步改进，步骤2中纳滤膜孔径为100?200nm。
[0011]作为上述发明的进一步改进，步骤2中冷冻离心的条件为_10°C、3000?5000rpm，时间为10?15min。
[0012]作为上述发明的进一步改进，步骤3中浓缩液的用量为5?10mL，正戊醇和乙酸乙酯的混合液的用量为25?45 mL，混合液中正戊醇和乙酸乙酯的体积比为I?5:3?9。
[0013]作为上述发明的进一步改进，步骤4中上清和95%乙醇水溶液的体积比为2?9:7 ?14。
[0014]作为上述发明的进一步改进，步骤5中沉淀用量为5?20g，正丁醇和三氯甲烷的混合液的用量为30?50mL，混合液中正丁醇和三氯甲烷的体积比为I?6:4?12。
[0015]作为上述发明的进一步改进，步骤6中上清和95%乙醇水溶液的体积比为3?12:5 ?25。
[0016]本发明的检测方法简单，所需样品量少，为进一步研宄红松种仁多糖的药效作用提供了一种实用有效的提取分析方法。
【具体实施方式】
[0017]实施例1
红松种仁多糖的检测方法，包括以下步骤:
步骤I，取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取；
步骤2，将步骤I所得提取液冷冻离心，所得离心上清纳滤浓缩；
步骤3，在步骤2所得浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤4，在步骤3所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，弃上清；
步骤5，在步骤4所得沉淀中加入正丁醇和三氯甲烷的混合液，搅拌后静置，弃沉淀；步骤6，在步骤5所得上清中加入95%乙醇水溶液，离心，所得沉淀经无水乙醇洗涤，即得红松种仁多糖；
步骤7，将步骤6所得红松种仁多糖用紫外分光光度计，490nm处测定吸光度值，以葡萄糖做对照，测定含量。
[0018]步骤I中红松种仁的用量为20g，蒸馏水的用量为10mL。
[0019]步骤I中回流提取温度为70 °C，时间为Ih。
[0020]步骤2中纳滤膜孔径为10nm0
[0021]步骤2中冷冻离心的条件为_10°C、3000rpm，时间为lOmin。
[0022]步骤3中浓缩液的用量为5mL，正戊醇和乙酸乙酯的混合液的用量为25mL，混合液中正戊醇和乙酸乙酯的体积比为1:3。
[0023]步骤4中上清和95%乙醇水溶液的体积比为2:7。
[0024]步骤5中沉淀用量为5g，正丁醇和三氯甲烷的混合液的用量为30mL，混合液中正丁醇和三氯甲烷的体积比为1:4。
[0025]步骤6中上清和95%乙醇水溶液的体积比为3:5。
[0026]经上述检测方法检测，红松种仁多糖含量为58.9%。
[0027]实施例2
红松种仁多糖的检测方法，包括以下步骤:
步骤I，取干燥的红松种仁，加入蒸馏水，回流提取；
步骤2，将步骤I所得提取液冷冻离心，所得离心上清纳滤浓缩；
步骤3，在步骤2所得浓缩液加入正戊醇和乙酸乙酯的混合液，搅拌后静置，弃沉淀； 步骤4，在步骤3所得上清中加入95%乙醇水溶液