预测谷丙转氨酶正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病毒感染者肝脏纤维化程度的系统的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医学领域中预测谷丙转氨酶正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病 毒感染者肝脏纤维化程度的系统。
【背景技术】
[0002] 谷丙转氨酶（ALT)长期以来作为筛查及监测肝脏疾病的重要指标在临床上广 泛使用。亚太及美国肝病协会关于慢性乙型病毒性肝炎的指南均将ALT值在2倍以上 ULN(upper limit of normal，正常值上限）的增高作为慢性乙型肝炎病毒感染者抗病毒治 疗的必要条件之一。然而文献显示，ALT正常或轻度升高（<2ULN)的慢性乙型肝炎病毒感 染者，肝脏亦可能存在隐匿性的损害，如不立即抗病毒治疗，可能导致病情的延误。近期一 篇针对830例ALT正常的慢性乙型肝炎病毒感染者的meta分析显示，20. 7%的患者存在明 显纤维化，对这部分患者，各指南均推荐肝脏活检来辅助制定抗病毒决策，且肝脏穿刺病理 显示为中重度炎症者或明显纤维化者被建议立即进行抗病毒治疗。肝脏穿刺活检是侵袭性 检查，存在判读和取样误差，且有出血、胆漏等风险，不适用于所有患者。现有的慢性乙型病 毒性肝炎无创纤维化诊断指标或模型研究，主要局限于ALT升高（尤其是ALT彡2ULN)的 队列，对于ALT正常或轻度升高（ALT <2ULN)的人群鲜有关注。临床亟需开发非侵袭性方 法辅助ALT正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病毒感染者判断肝脏纤维化程度，并辅助临床 抗病毒治疗决策的制定。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是如何预测慢性乙型肝炎病毒（HBV)感染者特别是 谷丙转氨酶正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病毒感染者肝脏的纤维化程度。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测人体液中五种指标的系统在制备用 于预测人肝脏纤维化程度的系统中的应用。
[0005] 本发明所提供的检测人体液中五种指标的系统在制备用于预测人肝脏纤维化程 度的系统中的应用中，所述五种指标为转化生长因子-α含量、白细胞介素-2受体含量、血 小板数量、是否含有乙型肝炎e抗原和乙型肝炎病毒DNA含量。
[0006] 上述应用中，所述检测人体液中五种指标的系统为检测人体液中所述五种指标所 需的试剂和/或试剂盒和/或仪器。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述Bl或B2的应用：
[0008] B1、检测人体液中Al和A2的系统在制备用于预测人肝脏纤维化程度的系统中的 应用；
[0009] B2、检测人体液中Al和A3的系统在制备用于预测人肝脏纤维化程度的系统中的 应用；
[0010] 所述Al为转化生长因子-α含量和白细胞介素-2受体含量；所述A2为血小板数 量、是否含有乙型肝炎e抗原和乙型肝炎病毒DNA含量中任意两种；所述A3为血小板数量、 是否含有乙型肝炎e抗原和乙型肝炎病毒DNA含量中任意一种。
[0011] 上述Bl或B2的应用中，所述检测人体液中Al和A2的系统为检测人体液中所述 Al和所述A2所需的试剂和/或试剂盒和/或仪器；所述检测人体液中Al和A3的系统为 检测人体液中所述Al和所述A3所需的试剂和/或试剂盒和/或仪器。
[0012] 上文中，所述检测转化生长因子-α含量的系统和所述检测白细胞介素-2受体含 量的系统均包括通过Luminex方法检测所需的试剂和/或试剂盒和/或仪器=Luminex检 测的荧光微球、特异性抗体和流式细胞仪。
[0013] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述1)-3)中任一种应用：
[0014] 1)以人体液中转化生长因子_α、白细胞介素-2受体、血小板、乙型肝炎e抗原和 乙型肝炎病毒DNA作为标志物在制备用于预测人肝脏纤维化程度的系统中的应用；
[0015] 2)以人体液中Cl和C2作为标志物在制备用于预测人肝脏纤维化程度的系统中的 应用；
[0016] 3)以人体液中Cl和C3作为标志物在制备用于预测人肝脏纤维化程度的系统中的 应用；
[0017] 所述Cl为转化生长因子-α和白细胞介素-2受体；所述C2为血小板、乙型肝炎 e抗原和乙型肝炎病毒DNA中任意两种；所述C3为血小板、乙型肝炎e抗原和乙型肝炎病 毒DNA中任意一种。
[0018] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述D1-D3中任一种预测人肝脏纤维化程 度的系统：
[0019] D1、预测人肝脏纤维化程度的系统，为所述检测人体液中上述五种指标的系统；
[0020] D2、预测人肝脏纤维化程度的系统，为所述检测人体液中Al和A2的系统；
[0021] D3、预测人肝脏纤维化程度的系统，为所述检测人体液中Al和A3的系统。
[0022] 上文中，所述人体液具体可为人血清、人血浆或人外周全血；具体的，转化生长因 子-α含量为人血清或人血浆中转化生长因子-α浓度；白细胞介素-2受体含量为人血清 或人血浆中白细胞介素-2受体浓度；血小板数量为人外周全血中血小板数量；是否含有乙 型肝炎e抗原为人血清或人血浆中的是否含有乙型肝炎e抗原；乙型肝炎病毒DNA含量为 人血清或人血浆中乙型肝炎病毒DNA浓度。
[0023] 为解决上述技术问题，本发明还提供了用于预测人肝脏纤维化程度的系统。
[0024] 本发明所提供的用于预测人肝脏纤维化程度的系统，包含以下模块：
[0025] 1)计算模块，所述计算模块计算Fib-index，所述Fib-index = exp (gx2) / [l+exp(gx2)]；
[0026] 其中，gx2 = 0· 003XIL-2R-0. 016XPLT+0. 057XTGF-a -〇· 639+Y ;
[0027] 所述IL-2R为人血清中白细胞介素-2受体的含量，单位为pg/mL ;所述PLT为人 外周全血中血小板的数量，单位为X IO9个/L ;所述TGF-α为人血清中生长转化因子-a 的含量，单位为pg/mL ;所述Y，当人血清中乙型肝炎e抗原检测结果为阴性，人血清中乙型 肝炎病毒DNA含量< 2000IU/mL时，Y的值为2. 072 ;当人血清中乙型肝炎e抗原检测结果 为阴性，人血清中乙型肝炎病毒DNA含量彡2000IU/mL时，Y的值为0. 048 ;当人血清中乙型 肝炎e抗原检测结果为阳性，人血清中乙型肝炎病毒DNA含量< 20000IU/mL时，Y的值为 I. 886 ；
[0028] 2)预测模块，所述预测模块根据所述Fib-index预测人肝脏纤维化程度。
[0029] 上文中，所述人可为慢性乙型肝炎病毒感染者，具体的，所述慢性乙型肝炎病毒感 染者为谷丙转氨酶正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病毒感染者。
[0030] 本发明中，所述肝脏纤维化程度按照Ishak标准进行分级；所述肝脏纤维化程度 可为明显纤维化和/或无明显纤维化；所述明显纤维化为Fibrosis大于等于3 (即F彡3)， 所述无明显纤维化为Fibrosis为0-2 (即0 < F < 2)。
[0031] 上文中，当以谷丙转氨酶正常或轻度升高（0ULN < ALT < 2ULN)的中国慢性乙型 肝炎病毒感染者或以ALT多2ULN的中国慢性乙型肝炎病毒感染者为检测对象时，检测结果 判定标准如下：如果所述检测对象的Fib-index界值多0. 44时，该检测对象为明显肝纤维 化患者，如果所述检测对象的Fib-index界值< 0. 44时，该检测对象为无明显肝纤维化患 者。
[0032] 本发明中，谷丙转氨酶正常或轻度升高的慢性乙型肝炎病毒感染者为人血清中谷 丙转氨酶的含量大于OULN小于2ULN的慢性乙型肝炎病毒感染者。
[0033] 实验证明，本发明以转化生长因子-α、白细胞介素_2受体、血小板、乙型肝炎e 抗原和乙型肝炎病毒DNA作为标志物建立的无创模型Fib-index对包括ALT正常或轻度 升高（< 2ULN)和ALT彡2ULN的慢性乙型肝炎病毒感染者都具有诊断价值。无创模型 Fib-index对谷丙转氨酶正常或轻度升高（ALT < 2ULN)的151例入选慢性乙型肝炎病毒感 染者中的明显肝纤维化的受试者进行ROC曲线分析，工作曲线下面积（AUC)为0.82(95% CI 0· 75, 0· 90)，优于既往纤维化模型 APRI [AUC = 0· 74 (95 % CI 0· 65, 0· 83) ]，FIB-4 [AUC =0.67(95% Cl 0.57,0.76)];当 Fib-index 界值彡 0.44,敏感性为 63.6%，特异性为 90. 6%，阴性诊断率为85. 7%，阳性诊断率为73. 7%，准确率为82. 7% ;交叉验证显示： Fib-index能正确诊断出81 %的患者，优于既往纤维化模型APRI (74% )及FIB-4 (64% )。 无创模型Fib-index对227例入选慢性乙型肝炎病毒感染者中的明显肝纤维化的受试者进 行ROC曲线分析，工作曲线下面积（AUC)为0. 78(95% CI 0. 71，0. 85)，优于既往纤维化模 型 APRI [AUC = 0· 66 (95 % CI 0· 58, 0· 74) ]，FIB-4 [AUC = 0· 63 (95 % CI 0· 55, 0· 73)];当 Fib-index界值彡0. 44,敏感性为66. 7%，特异性为80. 17%，阴性诊断率为85. 5%，阳性诊 断率为64. 1%，准确率为70. 0% ;交叉验证显示无创模型Fib-index对明显纤维化患者的 诊断正确率（79% )高于既往纤维化模型APRI (68% )及FIB-4 (