一种吡噻菌胺残留量的gc-ei-ms快速测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种化嚷菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，更具体地说是采用气 相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性定量测定猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉等动物肌肉 及制品等脂肪含量高的动物源性食品中残留的化嚷菌胺含量的方法，属于农药残留量的测 定技术领域。
【背景技术】
[0002] 化嚷菌胺(Penthiopyrad)是日本Ξ井化学公司研发的新颖酷胺类杀菌剂，英文通 用名为 penthiopyrad，试验代号：MTF-753，商品名为 Afetofluapro XAS 登录号：183675-82- 3,化学名称为(RS)-N-[2-(l，3-二甲基下基)-3-嚷吩基]-甲基-3-(Ξ氣甲基)-lH-化挫-4- 甲酯胺，化学结构式为：
[0003] 化嚷菌胺与现有的簇酷胺类杀菌剂有不同的杀菌谱，除了与现有簇酷胺类杀菌剂 一样对担子菌有效外，其对子囊菌、不完全菌亦有效，现被推荐用于防治对其他杀菌剂具抗 性的灰霉病和白粉病。该药剂通常使用的有效成分剂量为100~200g/hm2,其被广泛应用于 果树、蔬菜、草坪等众多作物，防治诱病、菌核病、灰霉病、霜霉病、苹果黑星病和白粉病。 化nthiopyrad于2008年在日本获得首次批准，用于果树、蔬菜和观赏植物，后又于2011年11 月在加拿大获准登记。商标名为Ve;rtisan和i^ntelis(均Wpenthiopyrad 200g/L为其活性 成分)和化6〇1'13(96111:11；[097'曰(1100邑/]^+油1〇1'〇1:11曰1〇]1；[1(百菌清)250邑/]^)的3个产品主要 用在果树、蔬菜和田间作物上，在实际应用发现化嚷菌胺具有很广阔的应用前景。
[0004] 随着化嚷菌胺的登记、推广和使用，作为我国主要出口市场的欧盟、加拿大和澳大 利亚等国家制定了其在蔬菜、水果、粮谷和畜产品等食品农产品中的最大允许残留量 (MRL)，加拿大规定化嚷菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的MI?L为0.01~ 30mg/kg;澳大利亚规定化嚷菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的脈L为 0.01~5mg/kg;欧盟规定化嚷菌胺在果蔬、坚果、粮谷及畜产品等动物源性食品中的Μ化为 0.01~30mg/kg;欧盟、日本等国家规定若田间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应 的残留限量标准时，出口至其国家的食品农产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均 实行O.Olmg/L的"一律标准"。
[0005] 现阶段，对化嚷菌胺残留量测定方法的研究较少，报道的检测方法主要为蔬菜和 水果中化嚷菌胺残留检测方法，运些检测方法均采用液相色谱串联质谱化C-MS/MS)测定蔬 菜和水果中化嚷菌胺残留量的检测方法，使用LC-MS/MSii定食品农产品中农药残留具有快 速、简便、灵敏度高等优点，但由于其价格较昂贵，很多检测机构、企业或科研院所未配置该 仪器或配置台数较少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS检测时，需使用不同的流动相或色 谱柱，运样需要不断更换色谱柱、流动相并耗费比较长的时间对系统进行平衡，运一定程度 上制约了 LC-MS/MS的应用。配备电子轰击电离源的气相色谱质谱(GC-EI-MS)分析食品农产 品中农药残留具有很大优势，由于电子轰击电离源质谱为通用性检测器，可实现几百种农 药的多残留分析，可同时定性和定量，价格适中，因此现各种检测机构和企业均配备气相色 谱-电子轰击离子源-质谱仪(GC-EI-MS)对食品农产品中的农药残留进行检测，但迄今为止 未见食品农产品中化嚷菌胺残留量的GC-EI-MS检测方法的报道。另外，众所周知，如E化邸S 前处理技术已成为农药残留分析中应用最广的样品前处理方法，但如E化ERS方法主要适用 于低脂肪含量的高含水基质，如大部分的水果蔬菜，在面对高脂肪含量基质时能力有限，一 般需要增加正己烧除脂、冷冻样品提取液去脂等步骤，但效果有限。近年来有些公司推出了 增强型脂质去除专利产品-Enhanced Matrix Removal，EMR-lipid，主要用于去除具有直链 控类结构的脂类干扰物，包括游离脂肪酸、胆固醇、甘油Ξ醋、憐脂等。该产品已被制成基质 固相分散萃取剂，经水活化后可直接通过分散固相萃取流程对提取液中的脂类杂质进行去 除，本发明应用该前处理方法净化动物源性食品时发现，该方法简单高效、对脂类物质去除 效果好，建立EMR基质分散净化、气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)定性和定量分 析动物源性食品中化嚷菌胺残留量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种化嚷菌胺残留量的GC-EI-MS快速测定方法，主要用于测 定动物源性食品等脂肪含量高的食品农产品中化嚷菌胺残留量。
[0007] 为实现W上目的，本发明所采用的技术方案是：一种化嚷菌胺残留量的GC-EI-MS 快速测定方法，包括如下步骤：
[000引（1)提取 称取混匀样品于具塞离屯、管中，加入适量水复苏后，定量加入乙腊溶液均质提取，然后 加入氯化钢和无水硫酸儀，剧烈满旋Imin后离屯、。
[0009] 净化 将增强型脂质去除产品EMR用水活化，移取样品提取液于活化好的EMR净化管中，满旋 Imin后，700化/min离屯、5min，转移全部上清液至装有无水硫酸儀和氯化钢的离屯、管中进行 盐析，满旋离屯、后，移取一定体积的上清液，浓缩至干后，用体积比为1/1的丙酬/正己烧混 合溶剂溶解定容，过膜后，待气相色谱-电子轰击离子源-质谱(GC-EI-MS)检测。
[0010] (3)标准工作溶液的配制 将不含化嚷菌胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化残 渣，加入适量溶剂和标准溶液，满旋混匀，配制成至少3个浓度的化嚷菌胺系列标准工作液。
[0011] (4)测定和结果计算 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行GC-EI-MS测定，W标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线;在相同条件下将步骤(2)中净化 后的样品液注入GC-EI-MS进行测定，测得样品液中化嚷菌胺的色谱峰面积，代入基质标准 工作曲线，得到样品液中化嚷菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品 中化嚷菌胺残留量;若上机溶液中化嚷菌胺残留量超过线性范围上限，需用定容溶剂将上 机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0012] 步骤(1)中样品若为动物肝脏等含水量较少的样品，提取前须加适量水充分浸润。
[0013] 步骤(4)中气相色谱条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm， 膜厚0.25皿;进样口溫度250°C ;载气：He，不分流模式进样，进样量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分钟20°C的速度升至200°C，然后W每分钟2 °C的速度升至220°C，再W每分钟20°C的速度升至280°C，保持lOmin;传输线溫度:280°C。
[0014] 步骤(4)中质谱条件为:离子源溫度150°C;四极杆溫度150°C;电离模式：电子轰击 电离，即EI模式，能量70eV;扫描方式：选择离子监测（SIM)模式，监测的离子为：302.1、 177.0、359.1、166.1。
[0015] 步骤(4)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标 准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均 出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在运种农药;若 上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0016] 本发明的有益效果在于：
[0017] 本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速并能有效避免样品中基质干扰 的样品前处理方法，将此前处理方法结合GC-EI-MS应用于粮谷、动物源性食品中化嚷菌胺 定性确证和定量检测，平均回收率为92.7 %~93.4%，平均相对标准偏差(RSD)为4.9 %~ 7.6%，检出限低于4.3祉g/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。能 满足美国、欧盟、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及 对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【附图说明】
[0018] 图1为添加在空白猪肉基质中的化嚷菌胺的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0019]图2为不含邮嚷菌胺的猪肉空白样品的GC-EI-MS选择离子色谱图。
[0020] 图3为W不含化嚷菌胺的猪肉空白样品为基质配制的化嚷菌胺标准工作曲线。
【具体实施方式】
[0021] 现下实施实例来说明本发明，但并不是限制本发明的范围。
[0022] 实施例中使用的仪器与试剂 T18 Basic均质器（11(4,60^11日117);〇?216虹离屯、机（日立，化9日11);153基本型旋满混合 器（IKA，Germany);TurboVap LV型样品自动浓缩仪（Caliper，USA);7890N气相色谱-5