-汤二氏综合征、科凯恩综合征（CS)、毛 发硫营养不良症、ATR-塞克尔综合征、LIG4综合征、人类免疫缺陷伴小头畸形、脊髓小脑 性共济失调伴轴索性神经病、共济失-调伴眼动失用症1型、共济失调伴眼动失用症2型、 戴-布二氏贫血、Rapadilino综合征、特科特综合征、塞克尔综合征、Lynch综合征、NBS样 综合征和RIDDLE综合征等等。
[0171] 如通过以上公开内容可以意识到，本发明具有多种多样的应用。本发明通过以下 实施例进一步阐述，这些实施例仅为说明性的而无意以任何方式限制本发明的定义和范 围。 实施例
[0172] 本发明的实施方案通过下文所示的实施例说明。所有参数和数据不应理解为限制 本发明的实施方案的范围。
[0173] 实施例1共济失调毛细管扩张小鼠樽铟证实Ye100 2施用作为长期治疗的益处
[0174] 将13只在ATM蛋白产生方面具有缺陷的小鼠每周一次注射Ye100 2。在将小鼠通 过基因分型而鉴定为纯合缺陷型之后（约1月龄）尽快开始，将Yel〇〇2(75mg/kg溶于盐水 载体）经皮下一周一次施用。正在进行的研究表明当与保持在相同设施中的相同品系的未 处理-/-小鼠的寿命数据相比时死亡率显著（P〈. 05)降低（图1)。预期寿命的差异为16 周，这转化成人类患者的12年，其将是AT人群的巨大缓解。
[0175] 实施例2对lH常和ATM缺陷细朐的作用机理研究掲露在Ye100 2施用后DNA修复 机制的h调
[0176] 高通量蛋白组学揭露Μ0Α
[0177] 将ATM缺陷LCL和正常LCL的烧瓶用PBS或Ye100 2孵育两小时。将指定的烧瓶暴 露于5Gy γ -辐射，然后在24小时后收获得自所有实验烧瓶的细胞。将细胞裂解，并提取蛋 白、溶解然后通过eFASP与0. 2% DCA消化。使用ERLIC在polyWAX LP柱上将得自eFASP 的所得肽基于等电点和亲水性而分离。将级分基于215nm UV-Vis吸光度曲线而混合，得到 25至30个级分。将每个级分上样到反相219柱并通过UPLC在nanoACQUITY上分离。将洗 脱的肽通过LC-MSE在Synapt HDMS上分析。将样品所有级分产生的原始数据文件合并，并 使用PLGS搜索。将DEC0用于校正存在于多个ERLIC级分中的任何肽的肽离子体积数据。
[0178] 对于对比分析，将每个经处理的数据集使用表达分析以头对头的方式进行比较， 以用于归一化、比率确定和表达差异的统计分析。N LCL或AT LCL的所有比率通过以下方 式确定：将IR的蛋白丰度或YEL002条件作为分子，并将PBS对照的蛋白丰度作为分母。蛋 白上调的阈值是大于〇. 45的自然对数比率，上调的p值大于0. 95 (参见表1)。
[0179] 表1.针对每种细胞系在每种条件中差异调控的蛋白的概述。
[0181] 表达分析使得能够在每个细胞系的处理组与对照组之间进行头对头比较。蛋白上 调的阈值是大于〇. 45的自然对数比率，上调的p值大于0. 95。唯一标识必须具有大于100 的PLGS得分。
[0182] 在条件中标记为唯一的蛋白必须通过超过100的PLGS得分来鉴定。在大多数情 况下，唯一蛋白标识具有远超过1，〇〇〇的PLGS得分。对于N24LCL和AT24LCL中每种条件 之间的比较，以得自AT24LCL的蛋白丰度作为分母来确定比率（参见表2)。
[0183] 表2.在细胞系之间在每种条件中差异调控的蛋白的概述。
[0184]
[0185] 表达分析使得能够针对每种条件在细胞系之间进行蛋白丰度的头对头比较。蛋 白上调的阈值是大于〇. 45的自然对数比率，上调的p值大于0. 95。蛋白上调的阈值是小 于-0. 45的自然对数比率，下调的p值小于0. 05。对任一细胞系唯一的蛋白必须具有大于 100的PLGS得分。
[0186] 上调的阈值相同，并且下调的阈值是小于-0. 45的自然对数比率，下调的p值小于 0.05。得自头对头比较的差异表达蛋白的独创性通路分析（Ingenuity pathway analysis) 允许确定IR和YEL002的宽蛋白组学效应，及其对ATM的依赖性。另外，我们可在无实验条 件的情况下对细胞系进行比较，以探索ATM缺陷的蛋白组学后果。
[0187] 在YEL002治疗后，存在ATM信号传导组分的富集（p值=5. 75E-05)，包括通过同 源重组（P值=7. 08E-04)和非同源重组（p值=4. 47E-05)而进行的DSB修复的组分。其 中最重要的是 ATM(N24YE L002，PLGS 得分 604)、MRE11 (比率 N24+PBS/N24+YEL002 = 0. 42， p 值=1. 00)、NBN(N24YEL002, PLGS 得分 678)和 RAD50 (N24YEL002, PLGS 得分 713)。在申 请人已执行的多项实验中，这些组分因低拷贝数而很少被鉴定出，特别是ATM。另外，YEL002 治疗诱导直接影响经由检测、切补修复和连接而进行的DNA损伤修复的蛋白的丰度的增 加。这些蛋白包括APEXUDDB1和XRCC4。
[0188] 染色体结构维持（SMC)蛋白是具有多种涉及染色体结构并在细胞周期和DNA损伤 修复45期间重塑的细胞功能的复合物的关键组分。SMC3 (黏连蛋白的组分）以及SMC2和 4 (凝缩蛋白的组分）在YEL002治疗后上调。
[0189] 在无功能性ATM的情况下，Ye100 2对复制、重组或同源重组中涉及到的许多DNA修 复蛋白发挥作用。这些包括 AKT1、BAX、BAG1、ARF1、CDK1/2/4、DAPS、BSG、H-RAS、RAC1、S11 和 REL。还存在 mTOR 信号传导组分 AKT、HRAS、R-RAS、MAPK1、RAC1、RHO A/C/G/J/T2 的上 调。
[0190] 所有出版物，包括但不限于在本说明书中引用的专利和专利申请（引用程度为它 们向本文所示的内容提供示例性的程序性补充或其它细节补充）具体地通过引用方式并 入本文，就像具体且单独地指出每份出版物在本文中以引用方式并入一样，如同在本文完 整示出。
[0191] 等同形式
[0192] 本领域的技术人员仅使用例行实验就将认识到或能够确定本文描述的本发明的 具体实施方案的许多等同形式。虽然讨论了主题发明的具体实施方案，但以上说明书是说 明性的而非限制性的。在查看本说明书后，本发明的许多变型形式对于本领域的技术人员 而言将变得显而易见。本发明的全部范围应通过参考权利要求书连同其等同形式的全部范 围以及说明书连同此类变化来确定。此类等同形式旨在由以下权利要求书所涵盖。
【主权项】
1. 一种缓和、治疗或改善患者中的DM修复缺陷障碍或与DM修复缺陷障碍相关的症 状的方法，所述方法包括W下步骤： (a)向需要缓和、治疗或改善DNA修复缺陷障碍或与DNA修复缺陷障碍相关的症状的受 试者施用药学有效量的组合物，所述组合物包含： (i)具有式1的化合物；或 扣）具有式2的化合物；或 (iii) (i)和/或（ii)的药学上可接受的盐或前药。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述DNA修复缺陷障碍选自共济失调毛细血管 扩张（A-T)、着色性干皮病狂P)、范可尼贫血（FA)、李-佛美尼综合征、奈梅亨断裂综合征 (NB巧、A-T样障碍（ATLD)、沃纳综合征、布卢姆综合征、罗-汤二氏综合征、科凯恩综合征 (CS)、毛发硫营养不良症、ATR-塞克尔综合征、LIG4综合征、人类免疫缺陷伴小头崎形、脊 髓小脑性共济失调伴轴索性神经病、共济失调伴眼动失用症1型或共济失调伴眼动失用症 2型、戴-布二氏贫血、Rapadi1ino综合征、特科特综合征、塞克尔综合征、Lynch综合征、NBS 样综合征或RIDDLE综合征。3. -种调节DNA修复酶的水平或活性或编码DNA修复酶的基因的水平或活性的方法， 所述方法包括W下步骤： (a)向需要调节DNA修复酶的水平或活性或编码DNA修复酶的基因的水平或活性的受 试者施用药学有效量的组合物，所述组合物包含： (i)具有式1的化合物；或 扣）具有式2的化合物；或 (iii) (i)和/或（ii)的单一立体异构体、立体异构体的混合物、药学上可接受的盐或 前药。4. 根据权利要求3所述的方法，其中所述DNA修复酶选自ATM、MRE11、NBN、RAD50、 APEX1 (APEX核酸酶1)、孤B1 (损伤特异性DM结合蛋白1)、XRCC4、SMC3、SMC2、SMC4或凝 缩蛋白。5. 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述化合物为化1002。6. 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述化合物包括式I或式II的结构或其 药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型晶体或前药：其中： 在式I，每个Ri、R2和R3独立地为氨、取代或未取代的直链或支链C1-C20烷基、締基或 締基、取代或未取代的环烷基、环締基、杂环烷基或杂环締基、苯基、取代的苯基、芳基、取代 的芳基、氨基、酷胺基、F、C1、化、I、硝基、径基、硫径基、烧硫基、砸径基、烧砸基、甲娃烷基、 甲娃烷氧基、棚烷基、簇酸、横酷基、-SO4H、烷氧基或酷基基团；并且 在式II中，Ri、R2、R3和R4独立地为氨、取代或未取代的直链或支链C1-C20烷基、締基 或締基、取代或未取代的环烷基、环締基、杂环烷基或杂环締基、苯基、取代的苯基、芳基、取 代的芳基、氨基、酷胺基、F、C1、Br、I、硝基、径基、硫径基、烧硫基、砸径基、烧砸基、甲硅烷 基、甲娃烷氧基、棚烷基、簇酸、横酷基、-SO4H、烷氧基或酷基基团。7.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中在式I中， 每个Ri独立地为W下一者或多者：畑2、0H、OMe、Me、H、CHzOH、BHz、SMe;X=S，HN，0,BH，邸2; Y =畑2,OH,OMe，Me,H，邸2地，BHz，SeMe，SMe;X=S，HN，0,BH，邸2， Y =畑2,OH,OMe，Me,H，邸2地，BHz，SeMe，SMe; 并且在式II中， Ri和R巧8.根据任一项前述权利要求所述的方法，具有所述结构的化合物基于式ΙΑ、式IIA或 式ΠΒ的化合物具有至少0. 7或更高的谷本系数：(式ΠΒ)9.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述化合物选自：或其组合。10. -种筛选有效作为缓和剂的化合物的方法，所述方法包括： 生成能够筛选抗DNA修复缺陷障碍的化合物的筛选系统； 使化合物接受所述筛选，W及 如果候选化合物相比于对照而言明显降低遗传不稳定性、诱导DNA修复、恢复干细胞 中的增殖调控、恢复骨髓中的细胞活力、增加红细胞祖细胞的数量或增加红血球的产生，则 鉴定所述化合物。
【专利摘要】本发明提供有效缓和、治疗或改善DNA修复缺陷障碍或DNA修复缺陷障碍的症状的化合物、组合物、试剂盒和方法。所述化合物、组合物、试剂盒和方法还有效调节DNA修复酶的水平或活性或编码DNA修复酶的基因的水平或活性。
【IPC分类】A61K31/34, A61K31/47, A61K31/38, A61P25/00, A61K31/437
【公开号】CN105246475
【申请号】CN201480028440
【发明人】R·H·希斯特尔, Y·O·李维纳, M·达沃伦
【申请人】加利福尼亚大学董事会
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2014年3月13日
【公告号】EP2983665A1, US20160030404, WO2014151529A1