一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法_4

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的制备:将10mL上述制得10mg mL 'MPA保护的CdTe (或PbS)QDs、lmL 20mg mL 4-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)溶液与上述20mL 10mg mL 1氨基修饰的S1 2纳米小球混合均勾,在4°C下搅拌反应6h。混合物离心分离,沉淀用水清洗4次,得到由CdTe (或PbS) QDs修饰的S1jfi米小球(S1 2iCdTe或Si02iPbS),并用 0.01M PBS 分散得 lOmg mL ^1^CdTe 或 Si02@PbS,备用。
[0050]cDNAl-Si02iPbS 和 cDNA2_Si02@CdTe 纳米生物探针的制备:
[0051 ] 将15mL上述制得的10mg mL ^1^CdTe (或Si02iPbS)纳米小球与8mL包含lmmol L tDC和ImM NHS的10mM Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲溶液混合,室温下搅拌反应lh。500 μ L 100 μ Μ的cDNAl (或cDNA2)加入到上述溶液中室温下搅拌过夜,离心去除多余互补链,所得沉淀重新用Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲溶液分散得到10mg mL kDNAl-S1^PbS (或cDNA2-Si02iCdTe)纳米生物探针,4°C避光保存,备用。
[0052](3)MB-aptamer 1 /DNA 1 -Si02iPbS 和 MB-aptamer2/DNA2_Si02@CdTe 纳米生物复合物的制备:
[0053]将20mL 步骤(2)制得的 10mg mL kDNAl-S1WPbS (或 cDNA2_Si02@CdTe)溶液加入到30mL步骤(1)制得的5mg mL ^B-aptamerl (或MB_aptamer2)溶液中,室温下震荡反应 2h 后得到 MB-aptamerl/DNAl_Si02@PbS (或 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe),磁分离再用Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲液冲洗,最后重分散于10mM Tris-HCl (pH = 7.4)缓冲溶液中得到15mg mL 1的磁控生物复合材料,备用。
[0054](4)对0ΤΑ和FBI标准品进行检测,建立标准曲线。
[0055]铋膜修饰的丝网印刷电极的制备:将与电化学工作站连接的丝网印刷电极浸入4mL pH = 2,Bi3+浓度为1.25mg mL 1的硝酸铋溶液中,外加电压_1.2V条件下,沉积120s,水洗并氮气吹干。
[0056]对0ΤΑ和FBI标准品进行检测,建立标准曲线:0,0.005,0.05,0.1,0.5,1,5,10,50ng mL 1 的 FBI 和 0,0.005,0.01,0.05,0.1,0.5,1,5,10ng mL 1 的 0ΤΑ 标准品分别与 lmL15mg mL 1 包含 MB-aptamerl/DNAl-S1 2iPbS 和 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe 的混合液反应,室温下温育60分钟后,用磁铁收集反应后的磁性复合材料,用0.lmol L 'PBS (pH 7.0)溶液冲洗后用包含lmL 0.lmol L W.0 PBS和200 μ L 0.lmol L 士^^^的混合溶液稀释得到底液。最后将工作站相联的铋膜修饰的丝网印刷电极浸入4mL含lmL底液和3mL 10mMHAc-NaAc缓冲溶液中,外加电压-1.0V下沉积Cd和Pb金属单质300s,然后改变外加电压范围从-1.2到-0.3V,利用方波伏安法检测Cd2+和Pb 2+的溶出峰,通过Cd 2+和Pb 2+的溶出峰高与对应0ΤΑ和FBI标准品浓度建立标准曲线。
[0057]上述实验所涉及的:
[0058]1.适配体 aptamerl 序列:5,- ATA CCA GCT TAT TCA ATT AAT CGC ATT ACC TTATAC CAG CTT ATT CAA TTA CGT CTG CAC ATA CCA GCT TAT TCA ATT AGA TAG TAA GTG CAATCT - SH - 3’ ;
[0059]2.适配体 aptamer2 序列:5,- GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGGACA-SH-3,;
[0060]3.单链 cDNAl 序列:5’ - TTG AAT AAG CTG GTA TAA GGT AAT GCG ATT AAT TGAATA AGC TGG TAT_NH2_3’ ;
[0061]4.单链 cDNA2 序列:5,- CCT TTA CGC CAC CCA CAC CCG ATC - NH2 - 3,;
[0062]5.0TA检测的标准曲线是指该传感器在与不同浓度的0TA和FBI标准品进行反应后,再将反应后的磁性复合材料磁收集并溶解在过量的稀硝酸中,并用电化学工作站方波伏安法沉积两种金属单质并检测Pb2+和Cd2+的溶出峰,根据不同浓度下Pb 2+和Cd2+的溶出峰值与对应的0ΤΑ和FBI标准品浓度制得的标准曲线。
[0063]从图2中可以看出,检测FBI和0ΤΑ标准品浓度的线性范围分别为:5pg mL10ng mL 1和5pg mL 1?5ng mL \均呈现良好的线性关系,对FBI的检出限达到了 0.5pgmL\对OTA的检出限达到了 1.lpg mL、
【主权项】
1.一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法,其特征在于,包括如下步骤: 步骤1、金纳米粒子包覆的Fe304微球的水分散液的制备; 步骤2、水溶性碲化镉量子点溶液和水溶性硫化铅量子点溶液的制备; 步骤3、单分散硅烷化Si02纳米粒子水分散液的制备; 步骤4、CdTe QDs包覆的S1jfi米球分散液和PbS QDs包覆的S1 2纳米球分散液的制备:取步骤2制备的CdTe QDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、步骤3制备的Si02纳米粒子水分散液混合均匀,在冰水浴中搅拌反应,反应结束后,将产物离心分离、洗涤,再将产物分散到蒸馏水中,备用;取步骤2制备的PbS QDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、步骤3制备的Si02纳米粒子水分散液混合均匀,在冰水浴中搅拌反应,反应结束后,将产物离心分离、洗涤,再将产物分散到蒸馏水中,备用; 步骤5、MB-aptamerl和MB_aptamer2捕获探针的制备:包括用MB为载体负载经巯基修饰的伏马毒素B1的适配体1,简称为MB-aptamerl ;用MB为载体负载经巯基修饰的赭曲霉毒素A的适配体2,简称为MB-aptamer2 ;具体如下:将aptamerl的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液混合,振荡反应,反应完毕后,离心后得到即时活化的aptamerl溶液A,将所述活化的aptamerl溶液A与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe304微球的水分散液混合,得到混合液B,向混合液B中加入6-巯基己醇溶液得到混合液C,将混合液C进行振荡反应,反应完毕后,对产物进行磁性分离并洗涤,最后将产物重新分散到水中,备用;将aptamer2的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液混合,振荡反应,反应完毕后,离心后得到即时活化的aptamerf溶液D,将所述即时活化的aptamer2溶液D与步骤1得到的金纳米粒子包覆的Fe304微球的水分散液混合,得到混合液E,向混合液E中加入6-巯基己醇溶液得到混合液F,将混合液F进行振荡反应,反应完毕后,对产物进行磁性分离并洗涤,最后将产物重新分散到水中,备用; 步骤6、适配体1的互补链与Si02@PbS偶联得到cDNAl-Si02@PbS以及适配体2的互补链与Si02@CdTe偶联得到cDNA2-Si02@CdTe纳米生物探针的制备:取步骤4制备的CdTeQDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液混合,得到混合液G,将混合液G在室温下搅拌反应a,加入溶有适配体1的互补链的Tris-HCl缓冲溶液,得到混合液H,室温下进行搅拌反应b,反应完毕后离心得到产物,并将产物重新用Tris-HCl缓冲溶液分散,备用;取步骤4制备的PbSQDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液混合,得到混合液I,将混合液I在室温下搅拌反应c,加入溶有适配体2的互补链的Tris-HCl缓冲溶液,得到混合液J,对混合液J进行室温下搅拌反应d,反应完毕后离心得到产物,并将产物重新用Tris-HCl缓冲溶液分散,备用; 步骤 7、MB-aptamer 1 /DNA1 -Si02iPbS 和 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe 纳米生物复合材料的制备:取步骤6制得的CDNAl-Si02@PbS分散液与步骤5制得的MB-aptamerl分散液混合,得到混合液K,室温下振荡反应,反应完毕后磁性分离产物并洗涤,最后将产物重新分散于Tris-HCl缓冲液中,备用;取步骤6制得的cDNA2-Si02@CdTe分散液与步骤5制得的MB-aptamer2分散液混合,得到混合液L,室温下振荡反应,反应完毕后磁性分离产物并洗涤,最后将产物重新分散于Tris-HCl缓冲液中,备用; 步骤8、传感器的构建及样品的检测,包括: 铋膜修饰的
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