丝网印刷电极的制备:将与电化学工作站连接的丝网印刷电极浸入硝酸铋溶液中，通过外加电压e沉积Bi3+，沉积完毕后，洗涤并干燥，铋膜修饰的丝网印刷电极； 对OTA和FBI标准品进行检测，建立标准曲线:将FBI和OTA标准品溶液分别与含有MB-ap tamer 1 /DNA 1 -S i 02iPb S 和 MB-aptamer2/DNA2-Si02@CdTe 的混合液反应，室温下温育，反应完毕后用磁铁收集反应后的磁性复合材料，用PBS冲洗后用含有PBS和!1勵3的混合溶液稀释得到底液；将工作站相联的铋膜修饰的丝网印刷电极浸入含底液和HAc-NaAc缓冲溶液的混合溶液中，在外加电压f下沉积Cd和Pb金属单质，然后利用方波伏安法检测Cd2+和Pb2+的溶出峰，通过Cd2+和Pb 2+的溶出峰高与对应OTA和FBI标准品浓度建立标准曲线。2.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤1中，金纳米粒子包覆的Fe304微球分散液的浓度为5mg mL S步骤2中，水溶性碲化镉量子点溶液和水溶性硫化铅量子点溶液的浓度均为10mg mL ^3.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤2中，水溶性碲化镉量子点的制备方法为:将0.065g的Te粉和0.05g的NaBH4加入到10mL水中，通氮气在冰水浴中反应至Te粉溶解完全，得到NaHTe溶液，保存；将0.1142g CdCl2.2.5Η20和210 μ L的巯基丙酸与50mL水混合，用lmol L 'NaOH调节pH值为8?9，得到混合液M，通氮气除氧30min ;在强磁力搅拌条件下，移取2mL的NaHTe溶液快速注入混合液Μ中，然后移到水热釜中保持80°C反应70min。停止反应恢复至室温后加入过量乙醇搅拌然后静置15min，将所得溶液以离心，取沉淀重新分散得到10mgmL 1水溶性CdTe QDs溶液，4°C避光保存。4.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤4中，制备CdTe QDs包覆的S1jfi米球时，所用的CdTe QDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、S1jfi米粒子水分散液的体积比为10:1:20 ;制备PbS QDs包覆的Si02纳米球时，PbS QDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液、Si02纳米粒子水分散液的体积比均为10:1:20 ;所用的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液的浓度为20mg mL \所用的Si02纳米粒子水分散液的浓度为10mg mL \5.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤5中，制备活化的aptamerl溶液A时，所用的aptamerl的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1:1，aptamerl的浓度为0.lmmol L S制备混合液B时，所用的活化的aptamerl与MB分散液的体积比为1:30 ;制备混合液C时，所用的混合液B与6-巯基己醇溶液的体积比为31:30 ;制备活化的aptamer2溶液D时，所用的aptamer2的Tris-HCl缓冲溶液与含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为1:1，aptamer2的浓度为0.lmmol L S制备混合液E时，所用的活化的aptamer2与MB分散液的体积比为1:30 ;制备混合液F时，所用的混合液E与6-巯基己醇溶液的体积比为31:30 ;步骤5中，所用的磷酸三氯乙酯的浓度均为0.lmol L \6-巯基己醇溶液的浓度均为2 μπιο? L \所有的振荡反应均在37°C下进行，反应时间均为12h06.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤5中，在得到混合液B或混合液E后，向混合液B或混合液E中分四次加入2mol L 'NaCl溶液，所加入的NaCl溶液体积依次为0.8mL、0.8mL、1.8mL、7mL。7.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤6中，制备混合液G时，CdTe QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为15:8 ;制备混合液Η时，所用的溶有aptamerl的互补链的Tris-HCl缓冲溶液与混合液G的体积比为1:46 ;制备混合液I时，PbS QDs包覆的Si02纳米球的水分散液与含有1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl缓冲溶液的体积比为15:8 ;制备混合液Η时，所用的溶有aptamer2的互补链的Tris-HCl缓冲溶液与混合液G的体积比为1:46 ;所述的搅拌反应a、b、c、d均在室温下进行，所述搅拌反应a、c反应时间均为lh，所述搅拌反应b、d反应时间均为12h ;步骤6中，所用的1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为lmmol L ^8.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤7中，制备混合液Κ时，所用的CDNAl-Si02@PbS分散液与MB-aptamerl分散液的体积比为2:3，cDNAl-Si02iPbS分散液的浓度为10mg mL \MB-aptamerl分散液的浓度为5mg mL %制备混合液L时，所用的cDNA2_S1 2iCdTe分散液与MB-aptamer2分散液的体积比为2:3，cDNA2-Si02iCdTe分散液的浓度为10mg mL \MB-aptamer2分散液的浓度为5mg mL:09.根据权利要求1所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，步骤8中，所述的硝酸铋溶液浓度为1.25mg mL1，所述外加电压e为-1.2V，外加电压e的沉积时间为120秒；所述FBI标准品的浓度为0?10ng mL \所述0TA 标准品的浓度为 0 ?50ng mL \ 所用的 MB-aptamerl/DNAl-Si02@PbS 和 MB_aptamer2/DNA2-Si02iCdTe 的混合液体积为 lmL，MB-ap tamer 1 /DNA 1 -S i 02iPb S 和 MB_aptamer2/DNA2-Si02iCdTe的浓度均为15mg mL \所述温育时间为60分钟；含有PBS和200 μ L 0.1M11勵3的混合溶液中，所用的PBS溶液与ΗΝ03溶液的体积比为5:1，ΗΝ0 3溶液的浓度为0.lmolL S在含底液和HAc-NaAc缓冲溶液的混合溶液中，底液与HAc-NaAc缓冲溶液的体积比为1: 3，所用的HAc-NaAc缓冲溶液浓度为lOmmol L S所述外加电压f为-1.0V，外加电压f沉积时间为300秒；所述方波伏安法的电压为-1.2?-0.3V ;步骤8中，所用的PBS溶液浓度均为 0.lmol 1 \ pH 均为 7.0。10.根据权利要求1?9任意一项所述的一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，其特征在于，所用的适配体1序列为5’ - ΑΤΑ CCA GCT TAT TCA ATTAAT CGC ATT ACC TTA TAC CAG CTT ATT CAA TTA CGT CTG CAC ATA CCA GCT TAT TCA ATTAGA TAG TAA GTG CAA TCT - SH - 3’ ；适配体 2 序列为 5’ - GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAAAGG GAG CAT CGG ACA - SH - 3’;适配体 1 的互补链序列为 5’ - TTG AAT AAG CTG GTA TAAGGT AAT GCG ATT AAT TGA ATA AGC TGG TAT - NH2 - 3’;适配体 2 的互补链序列为 5’ - CCTTTA CGC CAC CCA CAC CCG ATC - NH2- 3’。
【专利摘要】本发明提供了一种通过磁控电化学适配体传感器同时检测两种霉菌毒素的方法，包括如下步骤：金纳米粒子包覆的Fe3O4微球的水分散液的制备；水溶性碲化镉量子点溶液和水溶性硫化铅量子点溶液的制备；单分散硅烷化SiO2纳米粒子水分散液的制备；碲化镉量子点包覆的SiO2纳米球分散液和硫化铅量子点包覆的SiO2纳米球分散液的制备；MB-aptamer1和MB-aptamer2捕获探针的制备；适配体1的互补链与SiO2PbS偶联得到cDNA1-SiO2PbS以及适配体2的互补链与SiO2CdTe偶联得到cDNA2-SiO2CdTe纳米生物探针的制备；MB-aptamer1/DNA1-SiO2PbS和MB-aptamer2/DNA2-SiO2CdTe纳米生物复合材料的制备；传感器的构建及样品的检测。本发明使用的丝网印刷电极结构简单，加工方法简便、成本低，具有检测方法操作方便、检测灵敏度高等特点。
【IPC分类】B82Y40/00, B82Y30/00, G01N27/327
【公开号】CN105424777
【申请号】CN201510891030
【发明人】王成全, 钱静, 王坤, 黄星奕, 华梦娟, 刘倩, 郝楠
【申请人】江苏大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月7日