一种通过靶向prmt5抑制骨肉瘤生长的组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及骨肉瘤抑制研究及技术领域，具体设及一种通过祀向PRMT5抑制骨肉 瘤生长的组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 骨肉瘤是骨骼系统主要的恶性肿瘤之一，W浸润性生长破坏周围正常组织，W早 期即发生远处转移为特点，其临床预后差，给社会及家庭造成沉重的经济和精神负担。目前 临床上主要采用手术切除联合新辅助化疗方法进行综合治疗，使得骨肉瘤患者的5年生存 率从20%提高到了65-70%。然而，在过去的30年，骨肉瘤的复发率及转移性骨肉瘤的生存 率并没有明显改变，尤其是对于那些初诊时就已经发现转移的患者，5年的生存率仍然只有 约20%。另外，临床高剂量化疗药物如甲氨蝶岭、阿霉素、顺销等使用具有较大的副作用[1、 2]。运些现象皆表示现阶段骨肉瘤的治疗已遇到瓶颈，传统意义上对骨肉瘤发病机制的探 究也面临着一定的挑战。
[0003] 专利CN200610088827.8中公开了白血病患者骨髓细胞中PRms蛋白质精氨酸甲基 转移酶5的表达水平显著高于正常骨髓细胞，因此可W将PRMT5作为白血病标志物，还提供 了抑制PRMT5基因表达的小干扰RNA，通过小干扰RNA沉默PRMS基因，可W抑制PRMS基因缺 失细胞的增殖，表明PRMT5基因可W作为治疗白血病及肿瘤的药物祀标。PRms即蛋白质精 氨酸甲基转移酶5,属于II型PRMTs,它是II型中最早被鉴定的成员，位于人类染色体 Hqll.2。最近的研究也表明，PRMT5在许多人类实体瘤如肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、乳腺 癌、黑色素瘤、白血病或淋己瘤及恶性胶质瘤中呈高表达，且其高表达水平直接与肿瘤的进 程及预后差密切相关。然而，与W上肿瘤相比，骨肉瘤的发病率明显较低，且存在临床组织 样品收集困难等问题，使得Piarrs是否参与骨肉瘤的发病过程目前尚未有研究报道。在骨肉 瘤细胞系U20S中，PRirrs被发现与SNAIL及AJUBA蛋白相互作用，进而影响其细胞定位[3 ];然 后PRirrs在骨肉瘤组织中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生长的影响仍不清楚。近年来，表观 遗传调控酶在肿瘤发生发展中的作用已受到广泛关注，结合我们前期对PMT5蛋白的研究， 探讨WPiarrs作为骨肉瘤的临床预后生物标志物甚至祀向治疗具有重要意义。
[0004] 化p90(热休克蛋白90)是真核细胞中最丰富、最活跃的伴侣蛋白之一，通过保证蛋 白质的正确折叠W及防止蛋白的非特异性聚集，对维持细胞的正常活性至关重要。Hsp90的 祀蛋白中，超过50个祀蛋白广泛参与细胞增殖、分化和调亡[4]，与肿瘤发生密切相关。 Hsp90的抑制剂17-AAGQ7-丙締胺-17-去甲氧格尔德霉素)是一种苯酿安莎霉素类抗生素 的衍生物，通过结合改变化p90的分子伴侣功能，从而促进众多肿瘤细胞增殖和存活相关的 蛋白发生泛素化降解，具有显著的抗肿瘤活性，对正常细胞的毒性很小，在抗骨肉瘤的治疗 已经进临床试验阶段[5、6、7L17-AAG抑制骨肉瘤细胞生长的IC40是0.4咖(药物处理48小 时）[6]，1期临床结果提示17-446的最大药物耐受剂量是27〇111曰/111 2，增加药物浓度增加了一 些副作用的出现，如肝脏天冬氨酸转氨酶升高等，提示该药与其他合适的药物联合使用可 能会一方面增加疗效，一方面减少17-AAG的药物用量，减少副作用[5]。
[0005] 参考文献：
[0006] [1]L.MirabelIo，民.J.Troisi，S.A.Savage.Osteosarcoma incidence and survival rates from 1973to 2004:data from the Surveillance,Epidemiology,and End Results Program.C^ncer，2009,115(7):1531-43.
[0007] [2]K.民.Duchman，Y.Gao,B.J.Miller.Prognostic factors for survival in patients wit h high-grade osteosarcoma using the Surveillance,Epidemiology, and End Results(沈ER)Program database.Cancer 邱idemiology,2015,39(4):593-599.
[0008] [3]Hou Z,etc.The LIM protein AJUBA recruits protein arginine methyl transferase 5 to mediate SNAIL-dependent transcriptional r邱ression.Molecular&CelIular Biology,2008,28(10):3198-3207.
[0009] [4]Luke,WhiteselI，Susan L，Lindquist?HSP90and the chaperoning of cancer.Natur e reviews.Cancer,2005,5(10):761-72.
[0010] [5]Bagatell 民，etc.Phase I pharmacokinetic and pharmacodynamic study of 17-N-ally Iamino-I7-demethoxygeIdanamycin in pediatric patients with recurrent or refractory solid tu mors:a pediatric oncology experimental therapeutics investigators consortium study.Clin C ancer 民es.，2007，13(6): 1783-8.
[0011] [6]Gazitt Y,etc.Targeted therapy of human osteosarcoma with 17AAG or rapamycin: characterization of induced apoptosis and inhibition of mTO民 and Akt/MAPK/Wnt pathw ays.Int J Oncol.,2009,34(2):551-61.
[0012] [7]苟永胜.热休克蛋白90抑制剂17-丙締胺-17-去甲氧格尔德霉素增强热诱导骨 肉瘤细胞杀伤的研究.第四军医大学，2008.
【发明内容】
[0013] 针对现有技术的不足，我们首次发现，表观遗传酶PRMT5在骨肉瘤组织及细胞的表 达水平特异升高，通过细胞实验证实PRMT5和化的0在分子水平上协同发挥作用，通过泛素 化降解PRMT5来实现靴向PRMT5抑制骨肉瘤Saos-2细胞的生长，并结合Hsp90的抑制剂共同 发挥抑制骨肉瘤细胞生长的作用，因此提出一种通过靴向PRMT5抑制骨肉瘤生长的组合物 及其制备方法；该组合物通过PRMT5的抑制剂EPZ015666结合Hsp90的抑制剂17-AAG协同抑 制骨肉瘤细胞的生长，同时在分子水平掲示这两种抑制剂协同作用的机理，为骨肉瘤的防 治提供新思路。
[0014] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[00巧]一种通过靴向PRMT5抑制骨肉瘤生长的组合物，包括PRMT5抑制剂和Hsp90抑制剂： [0016] 所述PRMT5抑制剂为EPZ015666;所述Hsp90抑制剂为17-AAG。
[0017]作为本发明的一种优选的方案:所述EPZ015666的结构式为：
所述EPZ015666的分子量为383.44; >
[0019] 所述EPZO15666采用美国Se 1 Ieck品牌，产品货号：S7748的产品，产品规格:5mg，- 20°C低溫保存。
[0020]作为本发明的一种优选的方案:所述17-AAG的结构式为：
所述17-AAG的分子量为585.69;
[0022] 所述化p90采用美国Se 11 eCk品牌，产品货号：S1141的产品，产品规格:25mg，-20°C 低溫保存。
[0023] 作为本发明的一种优选的方案:按摩尔质量比计算，EPZ015666:17-AAG为0.5~2: 1;优选地，EPZO15666:17-AAG为2:1。
[0024] 一种通过祀向PM^抑制骨肉瘤生长的组合物的制备方法，包括W下步骤：
[0025] 1)将EPZ015666溶解到溶剂中，得到EPZ015666储备液；
[0026] 2)将17-AAG溶解到溶剂中，得到17-AAG储备液；
[0027] 3)将步骤1)得到的EPZ015666储备液和步骤2)得到的17-AAG储备液混合，得到通 过祀向Piarrs抑制骨肉瘤生长的组合物。
[0028] 优选地，所述溶剂为DMSO。
[00巧]优选地，步骤1)中，所述lmLEPZ015666储备液中含EPZ015666的质量为1.7~4mg。
[0030] 优选地，步骤2)中，所述ImLlT-AAG储备液中含17-AAG的质量为2.7~6mg。
[0031] 优选地，得到的通过祀向PRM^抑制骨肉瘤生长的组合物中，EPZ015666与17-AAG 的摩尔质量比为0.5~2:1;优选地，应用前，将组合物用溶剂稀释至17-AAG的工作浓度为 IOnM~50nM。
[0032] 优选地，该组合物可W W溶液的形式使用，也可W将溶剂挥发后制作成为粉末、W 及纳米缓释组合物添加剂添加到相应的载体上。
[0033] 本发明的有益效果在于：
[0034] 1、本发